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| 高密度发酵P.pastoris诱导表达葡聚糖外切酶 | |
| 作者姓名： | 杨穗珊 易国辉 屠发志 张添元 罗进贤 张爱联 |
| 基金项目： | 中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金资助项目，国家"863"项目 |
| 摘 要： | 目的:应用P.pastoris的pAOX1表达系统表达CBH Ⅱ酶.方法:PCR法扩增木霉的cbh Ⅱ基因.将其克隆进P.pastoris表达载体pPIC9k,电转法将其cbhⅡ基因重组于P.pastoris基因组,筛选高G418抗性的克隆为工程菌.重组CBH Ⅱ酶的生产是在50 L生物反应器中进行.连续24h补加甘油-PTM4增殖细胞,然后用甲醇诱导表达64h.结果:放罐时生物量为A600=180,重组CBHⅡ产量为80mg/L.表达产物具有酶解羧甲基纤维素的活性.结论:实现应用pAOX1表达系统在生物反应器中高密度发酵P.pastoris诱导表达CBH Ⅱ.该研究为重组CBH Ⅱ的规模化生产打下基础. |
| 关 键 词： | 葡聚糖外切酶 P.pastoris 高密度发酵 |
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