| 一种使用混合PCR筛选技术高效延伸水稻BAC—重叠群的方法 |
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| 引用本文： | 胡昊,穆洁,等.一种使用混合PCR筛选技术高效延伸水稻BAC—重叠群的方法[J].生物化学与生物物理学报,2002,34(3):358-364. |
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| 作者姓名： | 胡昊 穆洁 |
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| 作者单位： | 中国科学院上海生命科学研究院国家基因研究中心，中国科学院上海生命科学研究院国家基因研究中心，中国科学院上海生命科学研究院国家基因研究中心，中国科学院上海生命科学研究院国家基因研究中心，中国科学院上海生命科学研究院国家基因研究中心 上海200233，上海200233，上海 |
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| 基金项目： | 水稻基因组测序国际合作项目 (IRGSP )，中国科学院资助项目，国家科技部资助项目，上海市科委资助项目~~ |
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| 摘 要： | 使用“克隆连克隆 (clonebyclone)”战略进行水稻基因组测序需要依赖于构建好的基因组物理图。工作着眼于水稻籼稻广陆矮 4号 (OryzasativaindicaGuangLuAi4)第四号染色体长臂上 5 6 .1～ 6 8cM的区域 ,采用PCR方法筛选BAC全库来延伸重叠群 ,构建物理图。通过参照特异遗传探针定位的BAC克隆 (seedBAC)末端序列设计了 14对引物 ,按特定规则分成 3组 ,分别以代表水稻BAC库 (共 2 2 36 8个BAC )的 2 33个BACpool为模板进行PCR反应 ,一共获得了 6 5个阳性BAC克隆 ,通过末端测序、酶切杂交等方法确定了其中 2 9个BAC克隆作为有效延伸的克隆 ,延伸了 8个重叠群。通过酶切杂交、末端测序等方法还获知阳性BAC的延伸方向、延伸长度以及与seedBAC之间的重叠长度。8个重叠群总的延伸长度达到5 10kb。与实验室原用于作物理图的其他方法如指纹图、点杂交等相比 ,该方法有高效率、高灵敏度、专一性好、可重复使用等优点。创新之处在于通过引物的合理分组和PCR实验条件的改进降低了假阳性和假阴性率
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| 关 键 词： | 水稻 细菌人工染色体(BAC) PCR 重叠群 |
A High Efficient Approach Used for BAC-contig Extension of Oryza sativa with PCR Screening the BAC Clone Pools |
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| HU Hao $,LI Tao $,MU Jie,HAN Bin ,HONG Guo-Fan.A High Efficient Approach Used for BAC-contig Extension of Oryza sativa with PCR Screening the BAC Clone Pools[J].Acta Biochimica et Biophysica Sinica,2002,34(3):358-364. |
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| Authors: | HU Hao $ LI Tao $ MU Jie HAN Bin HONG Guo-Fan |
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| Institution: | HU Hao $,LI Tao $,MU Jie,HAN Bin *,HONG Guo-Fan * |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Oryza sativa BAC PCR contig |
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