| 巨大芽孢杆菌β-淀粉酶基因的克隆、表达和酶学性质分析 |
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| 引用本文： | 吴襟,张树政.巨大芽孢杆菌β-淀粉酶基因的克隆、表达和酶学性质分析[J].生物工程学报,2008,24(10). |
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| 作者姓名： | 吴襟 张树政 |
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| 作者单位： | 中国科学院微生物研究所,北京,100101 |
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| 基金项目： | 中国科学院知识创新工程项目 |
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| 摘 要： | 从巨大芽孢杆(Bacillus megaterium)的全基因组DNA文库中筛选出一个β-淀粉酶基因amyG,分析测定了其核苷酸序列并进行了诱导表达;其中amyG编码的蛋白有545个氨基酸、分子量为60.194 kD,与已报道的巨大芽孢杆菌DSM319的β-淀粉酶序列有着94.5%的同源性.经氨基酸序列比较分析发现,AmyG从N末端到C末端依次由信号肽域、糖基水解酶催化功能域和淀粉结合域3个功能域组成.其中催化功能域里含有第14家族糖基水解酶常见的几个高度保守的酶催化活性区.经多步纯化,重组酶的比活共提高了7.4倍,获得凝胶电泳均一的蛋白样品;经SDS-PAGE电泳测定,酶AmyG的分子量为57 kD.该酶的最适反应温度为60℃,最适反应pH为7.0;在温度不超过60℃时,酶活较稳定:AmyG能迅速降解淀粉生成麦芽糖,属于外切β-糖苷酶.
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| 关 键 词： | 巨大芽孢杆菌 β-淀粉酶 基因克隆和表达 酶学性质 |
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