| 基于细菌体系生产双链RNA的条件优化 |
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| 引用本文： | 计慧君,林羿光,付彤煜,郑思春.基于细菌体系生产双链RNA的条件优化[J].环境昆虫学报,2023(3):703-710. |
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| 作者姓名： | 计慧君 林羿光 付彤煜 郑思春 |
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| 作者单位： | 华南师范大学生命科学学院，昆虫科学与技术研究所，广州 510631;梅州市华师昆虫发育生物学与应用技术重点实验室广梅园研发中心，梅州514779 |
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| 基金项目： | 广州市民生科技攻关计划（201903010050） |
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| 摘 要： | 化学杀虫剂是农业害虫防治的主要手段，然而农业害虫已对化学杀虫剂产生了抗药性。RNA农药的应用将是减少使用化学杀虫剂的一种途径。RNA农药具有专一、高效、易降解和对环境友好等优点而受到了关注，但在靶标分子、靶标分子的双链RNA（dsRNA）生产工艺和应用制剂等方面仍需进一步研究。本研究以褐飞虱Nilaparvata lugens蛋白激酶B基因的dsRNA（dsNlAKT）为例，对利用细菌体系生产dsRNA的方法进行了探究。将NlAKT构建进L4440载体后，将其转化到缺乏核酸酶（RNase Ⅲ）的大肠杆菌Escherichia coli HT115（DE3）中，进行了dsRNA生产条件的测试。结果表明：（1）当异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）工作浓度为0.1 mM或0.5 mM时dsRNA的产量没有明显变化，而当其工作浓度增加至1 mM时dsRNA产量明显减少；（2）在IPTG诱导时间为2~8 h范围内，添加IPTG后诱导6 h获得的dsRNA产量最多；（3）在实验室常规提取RNA方法中，增加低剂量溶菌酶预处理这一步骤可增加提取产物中dsRNA的含量。试验结果证明了采用工作浓度为0.1 mM的IPTG诱导6 h的生产条件，并在提取过程中增加溶菌酶的预处理步骤有助于获得较高的dsRNA含量。研究结果为RNA农药的生产条件提供了实验依据。
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| 关 键 词： | 双链RNA RNA农药生产 细菌体系 RNA提取 |
Optimization of conditions for double stranded RNA production based on bacterial systems |
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| JI Hui-Jun,LIN Yi-Guang,FU Tong-Yu,ZHENG Si-Chun.Optimization of conditions for double stranded RNA production based on bacterial systems[J].Journal of Environmental Entomology,2023(3):703-710. |
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| Authors: | JI Hui-Jun LIN Yi-Guang FU Tong-Yu ZHENG Si-Chun |
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| Institution: | Guangdong Provincial Key Laboratory of Insect Developmental Biology and Applied Technology, Institute of Insect Science and Technology, School of Life Sciences, South China Normal University, Guangzhou 510631, China; Guangmeiyuan R&D Center of Meizhou Key Laboratory of Developmental biology and Applied Technology of Insects of South China Normal University, Meizhou 514779, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Double stranded RNA RNA pesticide production bacterial system RNA extraction |
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