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基于细菌体系生产双链RNA的条件优化
引用本文:计慧君,林羿光,付彤煜,郑思春. 基于细菌体系生产双链RNA的条件优化[J]. 环境昆虫学报, 2023, 0(3): 703-710
作者姓名:计慧君  林羿光  付彤煜  郑思春
作者单位:华南师范大学生命科学学院,昆虫科学与技术研究所,广州 510631;梅州市华师昆虫发育生物学与应用技术重点实验室广梅园研发中心,梅州514779
基金项目:广州市民生科技攻关计划(201903010050)
摘    要:化学杀虫剂是农业害虫防治的主要手段,然而农业害虫已对化学杀虫剂产生了抗药性。RNA农药的应用将是减少使用化学杀虫剂的一种途径。RNA农药具有专一、高效、易降解和对环境友好等优点而受到了关注,但在靶标分子、靶标分子的双链RNA(dsRNA)生产工艺和应用制剂等方面仍需进一步研究。本研究以褐飞虱Nilaparvata lugens蛋白激酶B基因的dsRNA(dsNlAKT)为例,对利用细菌体系生产dsRNA的方法进行了探究。将NlAKT构建进L4440载体后,将其转化到缺乏核酸酶(RNase Ⅲ)的大肠杆菌Escherichia coli HT115(DE3)中,进行了dsRNA生产条件的测试。结果表明:(1)当异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)工作浓度为0.1 mM或0.5 mM时dsRNA的产量没有明显变化,而当其工作浓度增加至1 mM时dsRNA产量明显减少;(2)在IPTG诱导时间为2~8 h范围内,添加IPTG后诱导6 h获得的dsRNA产量最多;(3)在实验室常规提取RNA方法中,增加低剂量溶菌酶预处理这一步骤可增加提取产物中dsRNA的含量。试验结果证明了采用工作浓度为0.1 mM的IPTG诱导6 h的生产条件,并在提取过程中增加溶菌酶的预处理步骤有助于获得较高的dsRNA含量。研究结果为RNA农药的生产条件提供了实验依据。

关 键 词:双链RNA;RNA农药生产;细菌体系;RNA提取

Optimization of conditions for double stranded RNA production based on bacterial systems
JI Hui-Jun,LIN Yi-Guang,FU Tong-Yu,ZHENG Si-Chun. Optimization of conditions for double stranded RNA production based on bacterial systems[J]. Journal of Environmental Entomology, 2023, 0(3): 703-710
Authors:JI Hui-Jun  LIN Yi-Guang  FU Tong-Yu  ZHENG Si-Chun
Affiliation:Guangdong Provincial Key Laboratory of Insect Developmental Biology and Applied Technology, Institute of Insect Science and Technology, School of Life Sciences, South China Normal University, Guangzhou 510631, China; Guangmeiyuan R&D Center of Meizhou Key Laboratory of Developmental biology and Applied Technology of Insects of South China Normal University, Meizhou 514779, China
Abstract:
Keywords:Double stranded RNA   RNA pesticide production   bacterial system   RNA extraction
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