肽聚糖识别蛋白AaPGRP-LC参与埃及伊蚊的抗细菌免疫反应

【目的】阐明在响应细菌感染的过程中,埃及伊蚊Aedes aegypti体内肽聚糖识别蛋白PGRPLC(Aa PGRP-LC)的功能。【方法】使用实时荧光定量PCR(q PCR)技术分析埃及伊蚊感染阴沟肠杆菌Enterobacter cloacae后不同时间抗菌肽(antimicrobial peptides,AMPs)基因的表达情况。结合RNA干扰技术和q PCR技术检测干扰Aa PGRP-LC后免疫相关基因转录模式的变化。使用原核表达系统表达Aa PGRP-LC,并通过Ni~(2+)-NTA柱纯化,通过免疫印迹分析检测所纯化蛋白的质量。【结果】阴沟肠杆菌感染埃及伊蚊6 h后埃及伊蚊体内抗菌肽基因的转录水平显著升高。干扰Aa PGRP-LC并用阴沟肠杆菌感染后,埃及伊蚊体内重要抗菌肽基因的转录水平显著降低,同时埃及伊蚊免疫缺陷(immune-deficiency,IMD)通路和Toll信号(Toll-like receptors)通路的免疫相关基因的表达量也显著降低。纯化得到条带单一的Aa PGRP-LC蛋白。【结论】Aa PGRP-LC参与调控埃及伊蚊重要抗菌肽基因的转录,在埃及伊蚊响应细菌感染的过程中起到了重要的调控作用。Aa PGRP-LC在参与调控IMD通路的同时,也可能参与了Toll信号通路的调控过程。从原核表达系统中获得的Aa PGRP-LC重组蛋白可用于下一步的功能研究。