短小芽孢杆菌碱性蛋白酶的提纯和性质的研究

由短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)209产生的胞外碱性蛋白酶的粗酶制剂(5×10 4u／g)，经硼砂NaOH缓冲液抽提，硫酸铵沉淀，Sephadex G一25脱盐，DEAE-纤维素柱层析，冷冻干燥获得部分纯化的酶。纯酶的活力为199x10u/g，比活力提高2，6倍。此酶的最适pH8．5—9．0，在pH6一10之间稳定，因此是属于微碱性蛋白酶“’。最适温度为50℃，在50℃以下稳定，在60℃处理10分钟活力损失95％。0.003村c丑件的存在对酶的热稳定性和pH稳定性均有显著提高。Ag+，Cu2+，Fe2+，Hg+，Zn2+ 对酶有抑制作用；Mn2+有明显的激活作用；1×10-3M的PCMB，IAA，O-PTH，PMSF对活力无影响；1×10-3M EDTA对酶有30％的抑制作用；在40℃用NBS(1×10-4M)、DFP(2．5mM)对醢进行10分钟处理，酶活力完全损失。此酶能水解多种天然蛋白，如酪蛋白、血红蛋白、蛇毒蛋白等，不水解鱼精蛋白和溶菌酶。以酪蛋白为底物测得的km值为0．66×10-2g／ml。在pH7．3进行圆盘凝胶电泳，虽然呈现九条带，但均具有大小不等的蛋白酶活力。