| 抗GPNMB单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA方法的建立 |
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| 引用本文： | 张健民,张凡喜,黄晓龙,周玉峰. 抗GPNMB单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA方法的建立[J]. 现代生物医学进展, 2013, 13(18): 3461-3465 |
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| 作者姓名： | 张健民 张凡喜 黄晓龙 周玉峰 |
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| 作者单位： | 解放军324医院神经外科 重庆400020 |
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| 摘 要： | 目的:制备抗GPNMB单克隆抗体,建立双抗体夹心ELISA检测GPNMB在胶质母细胞瘤中的表达情况.方法:以新鲜胶质母细胞瘤组织为材料,提取总RNA,通过RT-PCR扩增得到GPNMB cDNA序列,经NcoⅠ和XhoⅠ双酶切后,克隆入PET-28a(+)进行原核表达,经蛋白纯化得GPNMB-6× His融合蛋白；以该融合蛋白免疫BALB/c小鼠,淋巴细胞杂交瘤法制备单克隆抗体；采用Western-blot、双抗体夹心ELISA以制备所得的抗GPNMB抗体检测胶质母细胞瘤细胞系U251、U373、SHG44和星形胶质细胞系SVG12中GPNMB的表达.结果:成功构建了GPNMB原核表达载体,获得了GPNMB-6×His重组蛋白；制备得到了G203、F105和M306共3株抗GPNMB的单克隆抗体,腹水ELISA效价分别为1∶8000、1∶8000、1∶5000,抗体亚类分别为IgG2、IgG1和IgG1,进一步实验证实单克隆抗体G203和M306可用于双抗体夹心ELISA检测不同胶质细胞瘤细胞系中GPNMB的表达.结论:成功制备出抗GPNMB单克隆抗体,效价及特异性良好,并证实GPNMB在胶质母细胞瘤细胞系中高表达,为进一步研究GPNMB在胶质母细胞瘤中的作用奠定了基础.
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| 关 键 词： | 非转移性黑色素瘤糖蛋白B 胶质母细胞瘤 单克隆抗体 双抗体夹心ELISA |
Preparation of Monoclonal Antibodies against GPNMB and Establishment of Double Antibody Sandwich ELISA |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Glycoprotein non-metastatic melanoma protein B Glioblastoma Monoclonal antibody Double antibody sandwich ELISA |
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