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| 双效表达载体的构建及其U6启动子的功能效率鉴定 | |
| 引用本文： | 项海涛,杨彬,温峰琴,胡永浩,柳纪省.双效表达载体的构建及其U6启动子的功能效率鉴定[J].生物技术通报,2009(4). |
| 作者姓名： | 项海涛 杨彬 温峰琴 胡永浩 柳纪省 |
| 作者单位： | 1. 甘肃农业大学动物医学院,兰州,730070;中国农业科学院兰州兽医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点实验室,农业部畜禽病毒学重点开放实验室,农业部草食动物疫病重点开放实验室,兰州,730046 2. 中国农业科学院兰州兽医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点实验室,农业部畜禽病毒学重点开放实验室,农业部草食动物疫病重点开放实验室,兰州,730046 3. 甘肃农业大学动物医学院,兰州,730070 |
| 基金项目： | 国家重点基础研究发展规划(973计划)，国家高技术研究发展计划(863计划) |
| 摘 要： | 利用pBudcE4.1双表达载体构建shRNA与蛋白共表达载体,为双效疫苗的研制提供新的研究思路.以含U6启动子的载体为模板,PCR扩增得到U6启动子,用其置换载体pBudcE4.1内的CMV启动子的核心部分构建shRNA与蛋白共表达载体.用干扰绿色荧光蛋白表达的方法鉴定重组载体中的U6启动子能否启动shRNA的表达.经PCR扩增、双酶切鉴定及DNA测序证明成功构建了载体pBudcE4.1-U6.用干扰载体pBudcE4.1-U6-eGFPshRNA与含eGFP的载体共转染293T细胞后,荧光显微镜观察显示eGFP的表达量下降;流式细胞仪检测细胞的转染效率降低.研究结果证明U6启动子正常发挥作用. 成功构建RNAi与蛋白共表达载体,为利用该载体研制动物双效疫苗奠定了基础. |
| 关 键 词： | 共表达载体 U6启动子 构建 鉴定 |
Construction of Double-effect Vector and Function Identification of U6 Promoter |
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| Xiang Haitao,Yang Bin,Wen Fengqin,Hu Yonghao,Liu Jixing.Construction of Double-effect Vector and Function Identification of U6 Promoter[J].Biotechnology Bulletin,2009(4). | |
| Authors: | Xiang Haitao Yang Bin Wen Fengqin Hu Yonghao Liu Jixing |
| Abstract: | |
| Keywords: | RNAi |
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