美洲商陆抗病毒蛋白-Ⅱ基因的克隆和表达 |
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引用本文: | 黄建松,詹金彪,邹媛,冯微宏.美洲商陆抗病毒蛋白-Ⅱ基因的克隆和表达[J].生物工程学报,2006,22(4):592-597. |
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作者姓名: | 黄建松 詹金彪 邹媛 冯微宏 |
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作者单位: | 浙江大学医学院生物化学与分子生物学教研室,杭州,310006 |
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摘 要: | 根据报道的cDNA序列,用RT-PCR的方法从美洲商陆夏季的叶片中克隆美洲商陆抗病毒蛋白-Ⅱ(pokeweedantiviralproteinⅡ,PAP-Ⅱ)基因。将PAP-Ⅱ基因克隆至表达载体pET-28a( )并在大肠杆菌中表达,SDS-PAGE电泳分析结果表明,PAP-Ⅱ蛋白在BL21(DE3)菌中获得表达,表达产物以不溶性包涵体形式存在,经过溶解包涵体、复性和BBSTNTA树脂柱亲和层析纯化,获得高纯度的PAP-Ⅱ蛋白。用非放射性基于ELISA方法检测经过复性纯化后PAP-Ⅱ蛋白和蓖麻毒素A链(RTA)在体外对HIV-1整合酶有较强的抑制活性,其IC50分别约为303μg/mL,220μg/mL。用MTT法分析PAP-Ⅱ蛋白的生物学活性,复性纯化后蛋白对HEP-G2和Hela细胞有细胞毒作用,IC50分别为93μg/mL,102μg/mL,说明了PAP-Ⅱ蛋白能抑制肿瘤细胞的生长。构建的PAP-Ⅱ表达系统所表达的蛋白经复性后具有生物学活性,为进一步研究PAP-Ⅱ的抗HIV-1机制和抗肿瘤作用奠定了基础。
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关 键 词: | 核糖体失活蛋白 美洲商陆抗病毒蛋白-Ⅱ HIV-1整合酶 表达 细胞毒性 |
文章编号: | 1000-3061(2006)04-0592-06 |
收稿时间: | 01 4 2006 12:00AM |
修稿时间: | 04 5 2006 12:00AM |
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