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| 稳定表达HCV 1a NS5A和NS5A-ΔISDR细胞株的构建 | |
| 作者姓名： | 廖继佩 薛小平 徐志凯 尹文 雷迎峰 吕欣 杨敬 |
| 作者单位： | 第四军医大学微生物学教研室 陕西西安710032(廖继佩，薛小平，徐志凯，尹文，雷迎峰，吕欣)，第四军医大学微生物学教研室 陕西西安710032(杨敬) |
| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(30371280) |
| 摘 要： | 以pBRTM/HCV-3011模板,通过PCR法扩增ns5a、LISDR(左端序列)和RISDR(右端序列),分别经XhoⅠ/EcoRⅠ、XhoⅠ/HindⅢ和EcoRⅠ/HindⅢ双酶切,连入穿梭质粒pEGFP-N3中,构建重组质粒pEGFP-N3-ns5a和pEGFP-N3-ns5a-ΔISDR。对重组质粒进行酶切分析和序列测定。将这2种重组质粒通过电穿孔法转染HeLa细胞,然后在G418选择压力下进行有限稀释法筛选,用RT-PCR和荧光显微镜鉴定。经酶切鉴定和基因测序证实,重组穿梭质粒已插入目的片段ns5a、LISDR和RISDR。RT-PCR和荧光显微镜检测到目的基因的表达。以上结果说明成功构建了真核表达载体pEGFP-N3-ns5a和pEGFP-N3-ns5a-ΔISDR,目的基因在HeLa细胞中得到表达,为研究HCVNS5A中是否存在抗干扰素治疗的功能蛋白提供了实验材料。 |
| 关 键 词： | 丙型肝炎病毒 干扰素敏感决定区 HeLa细胞系 增强型绿色荧光蛋白 |
| 本文献已被 CNKI 等数据库收录！ | |