7型庚型肝炎病毒包膜糖蛋白E2基因的克隆及原核表达分析 |
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引用本文: | 杨晓钰,赵跃,冯悦,夏雪山.7型庚型肝炎病毒包膜糖蛋白E2基因的克隆及原核表达分析[J].病毒学报,2016,32(5). |
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作者姓名: | 杨晓钰 赵跃 冯悦 夏雪山 |
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作者单位: | 昆明理工大学生命科学与技术学院,昆明,650500;昆明理工大学生命科学与技术学院,昆明,650500;昆明理工大学生命科学与技术学院,昆明,650500;昆明理工大学生命科学与技术学院,昆明,650500 |
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摘 要: | 为了探究7型庚型肝炎病毒E2基因编码蛋白作为ELISA试剂盒研发所需检测抗原的可能性,建立更为可靠的GBV-C检测方法,本研究应用在线软件对GBV-C E2基因序列的编码区进行生物信息学分析,预测了E2基因编码蛋白的抗原表位、空间结构及线性B细胞表位等;通过逆转录PCR从7型GBV-C病毒中克隆出E2基因片段,将其克隆到pET-32a载体上,重组载体pET-32a-E2转化大肠杆菌BL21后诱导表达,用12%SDS-PAGE检测,结果重组蛋白主要以包涵体形式存在,其分子量大小约为55kD,利用His标签抗体对重组蛋白进行Western-blotting验证。结果表明GBV-C E2蛋白有多个抗原表位点,克隆的E2基因序列长度为945bp,重组蛋白以包涵体形式表达,其分子量大小与预期一致,此研究为GBV-C检测试剂盒的研制工作奠定了基础。
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关 键 词: | 庚型肝炎病毒 包膜糖蛋白 克隆 表达分析 |
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