一种经miniSOG标记的人腺病毒的制备 |
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作者姓名: | 邹小辉 肖蓉 郭小娟 屈建国 鲁茁壮 洪涛 |
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作者单位: | 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所,传染病预防控制国家重点实验室,北京100052;中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所,传染病预防控制国家重点实验室,北京100052;中国医学科学院药物研究所,北京100050 |
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基金项目: | 国家自然科学基金;国家科技重大专项 |
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摘 要: | 为了探索腺病毒感染细胞后病毒核心在胞内运输的过程,本研究构建了一株经miniSOG标记IX蛋白的人腺病毒。首先,我们通过重叠延伸PCR的方法合成了miniSOG基因,将其克隆至pcDNA3表达载体后转染293细胞,荧光显微镜下可观察到miniSOG蛋白的表达,经固定,封闭,DAB-H2O2染色,OsO4固定染色后,可见表达miniSOG蛋白的细胞呈深褐色。之后将miniSOG构建至腺病毒穿梭载体pShuttle的IX基因3’端,并通过与骨架质粒pAdeasy-1在E.coli BJ5183细菌内同源重组获得了重组腺病毒质粒pAd5-IXSOG。pAd5-IXSOG质粒经PacI酶切线性化后转染293细胞,拯救出重组腺病毒HAdV-5-IXSOG。经过8轮扩增,超速离心纯化后获得2.0ml浓度为6.0×1011vp/mL的重组腺病毒,电子显微镜下可见完整病毒颗粒。本研究经反向遗传学技术对腺病毒载体进行改造,成功制备了经miniSOG标记的重组腺病毒HAdV-5-IXSOG,该病毒可用于腺病毒感染细胞的实时追踪。
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关 键 词: | 腺病毒 Ⅸ蛋白 miniSOG 病毒拯救 |
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