中东呼吸综合征冠状病毒多重荧光定量RT-PCR检测技术的建立 |
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作者姓名: | 牛培华 陆柔剑 蓝佳明 刘高山 王文玲 谭文杰 |
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作者单位: | 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所;卫生部医学病毒和病毒病重点实验室,北京102206;中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所;卫生部医学病毒和病毒病重点实验室,北京102206;中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所;卫生部医学病毒和病毒病重点实验室,北京102206;中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所;卫生部医学病毒和病毒病重点实验室,北京102206;中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所;卫生部医学病毒和病毒病重点实验室,北京102206;中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所;卫生部医学病毒和病毒病重点实验室,北京102206 |
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摘 要: | 建立中东呼吸系统综合征冠状病毒(MERS-CoV)感染的筛查与诊断应用的核酸检测方法。本研究建立了基于MERS-CoV三个分子靶标(upE,ORF1b,N2)的双重以及三重的三种荧光定量RT-PCR检测技术方法,分别与前期建立的单重荧光定量RT-PCR(upE或N2)检测方法做了比较,并且采用MERS-CoV病毒毒株、上海提供的口岸发烧病人样本以及由首例中国MERS-CoV韩国地区输入病例的咽拭子样品和全血的样品做了临床验证。结果显示:采用MERS-CoV病毒毒株作为模板,三种新建立的多重检测方法与单重荧光定量RT-PCR检测方法最低检测限均能达到10PFU/mL,且与其他常见呼吸道病毒的阳性样本均无交叉反应,特异性良好。对临床样品的验证中,上海病人咽拭子样本均为阴性,而中国首例MERS输入病例的急性期咽拭子样品均为阳性,而全血样的检测结果显示N2靶标有较高检出率,明显优于基于upE单一靶标。本研究所建立的基于MERS-CoV三个分子靶标(upE,ORF1b,N2)的双重以及三重荧光定量RT-PCR检测技术方法用于MERS-CoV感染的实验室诊断,具有较高灵敏度与特异性及适用性。
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关 键 词: | 中东呼吸系统综合征 冠状病毒 荧光定量RT-PCR 多重 检测 |
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