| 携带EGFP基因的戊型肝炎病毒重组质粒的构建及其感染性的验证 |
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| 引用本文： | 李云龙,龙飞燕,杨臣臣,禹文海,毕艳红,王珏,姜典财,彭福春,井申荣.携带EGFP基因的戊型肝炎病毒重组质粒的构建及其感染性的验证[J].病毒学报,2016,32(5). |
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| 作者姓名： | 李云龙 龙飞燕 杨臣臣 禹文海 毕艳红 王珏 姜典财 彭福春 井申荣 |
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| 作者单位： | 昆明理工大学医学院,昆明,650500;中国医学科学院医学生物学研究所,昆明,650118;大连雅立峰生物制药有限公司,大连,116000;云南省洱源县右所镇畜牧兽医站,大理,671200 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金;云南省自然科学基金;中国博士后科学基金 |
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| 摘 要： | 为了构建携带增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因的戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)重组质粒,转染人肺癌细胞A549细胞验证其感染性,PCR法分两段扩增HEV全基因组序列和EGFP基因序列,将EGFP报告基因插入到HEV ORF2基因下游,并克隆到体外转录表达载体pGEM-7Zf(+)上。然后利用脂质体转染法将重组质粒转入A549细胞,24h后在荧光显微镜下观察EGFP的表达;转染72h后,利用免疫荧光法检测HEV ORF2蛋白的表达。转染7d后将发生病变的A549细胞收集作为接种物,接种A549细胞验证携带EGFP的HEV-EGFP重组病毒的感染性。结果显示经酶切和测序鉴定携带EGFP的HEV重组表达质粒pGEM-HEV-EGFP构建成功;EGFP基因与HEV在A549细胞中可融合表达;携带EGFP的HEV重组表达质粒转染A549细胞7d后出现病变,并且连续传代3代仍具有感染性。本研究成功构建了携带EGFP的HEV全基因组重组质粒pGEM-HEV-EGFP,并成功感染A549细胞,为进一步研究HEV的复制机制及致病机理奠定基础。
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| 关 键 词： | 戊型肝炎病毒(HEV) 增强型绿色荧光蛋白(EGFP) 感染性 |
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