| N端二硫键对11家族木聚糖酶热稳定性的影响 |
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| 引用本文： | 高树娟,汪俊卿,邬敏辰,唐存多,吴静.N端二硫键对11家族木聚糖酶热稳定性的影响[J].生物工程学报,2012,28(12):1441-1449. |
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| 作者姓名： | 高树娟 汪俊卿 邬敏辰 唐存多 吴静 |
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| 作者单位： | 江南大学医药学院，江苏 无锡 214122;江南大学生物工程学院，江苏 无锡 214122;江南大学医药学院，江苏 无锡 214122;江南大学生物工程学院，江苏 无锡 214122;江南大学医药学院，江苏 无锡 214122 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金 (No. 31101229) 资助。 |
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| 摘 要： | 以来源于米曲霉Aspergillus oryzae的11家族常温木聚糖酶AoXyn11A为母本,将其N端替换成同一家族耐热木聚糖酶EvXyn11TS的对应片段,构建出耐热杂合木聚糖酶AEx11A。将AoXyn11A和AEx11A基因分别在毕赤酵母GS115中进行表达并分析比较温度对表达产物酶活性的影响。结果表明,AEx11A的最适温度Topt为75℃,在70℃的半衰期t1/270为197 min,较AoXyn11A(Topt=50℃,t1/270=1.0 min)显著提高。通过对AEx11A结构的同源建模及其与AoXyn11A结构的比对,发现在AEx11A的N端引入了一个二硫键(Cys5–Cys32)。利用定点突变法将其5位的半胱氨酸突变为苏氨酸(C5T),去除该二硫键,以探讨其对AEx11A热稳定性的影响。分析表明,突变酶(AEx11AC5T)的Topt由突变前的75℃降为60℃,其t1/270和t1/280也分别由197 min和25 min缩短为3.0 min和1.0 min。
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| 关 键 词： | 木聚糖酶 N端替换 二硫键 热稳定性 定点突变 |
| 收稿时间： | 2012/7/17 0:00:00 |
Effect of N-terminal disulfide bridge on thermostability of family 11 xylanases |
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| Shujuan Gao,Junqing Wang,Minchen Wu,Cunduo Tang and Jing Wu.Effect of N-terminal disulfide bridge on thermostability of family 11 xylanases[J].Chinese Journal of Biotechnology,2012,28(12):1441-1449. |
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| Authors: | Shujuan Gao Junqing Wang Minchen Wu Cunduo Tang and Jing Wu |
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| Institution: | School of Medicine and Pharmaceutics, Jiangnan University, Wuxi 214122, Jiangsu, China;School of Biotechnology, Jiangnan University, Wuxi 214122, Jiangsu, China;School of Medicine and Pharmaceutics, Jiangnan University, Wuxi 214122, Jiangsu, China;School of Biotechnology, Jiangnan University, Wuxi 214122, Jiangsu, China;School of Medicine and Pharmaceutics, Jiangnan University, Wuxi 214122, Jiangsu, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | xylanase N-terminus substitution disulfide bridge thermostability site-directed mutagenesis |
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