| 表达O型口蹄疫病毒保护性抗原表位重组PRRSV的构建及其鉴定 |
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| 引用本文： | 童武,徐彦召,周艳君,姜一峰,张善瑞,王亚欣,朱建平,虞凌雪,孙晶,陈焕春,童光志. 表达O型口蹄疫病毒保护性抗原表位重组PRRSV的构建及其鉴定[J]. 生物工程学报, 2012, 28(12): 1431-1440 |
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| 作者姓名： | 童武 徐彦召 周艳君 姜一峰 张善瑞 王亚欣 朱建平 虞凌雪 孙晶 陈焕春 童光志 |
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| 作者单位： | 中国农业科学院上海兽医研究所，上海 200241；华中农业大学动物医学院，湖北 武汉 430070;中国农业科学院上海兽医研究所，上海 200241;中国农业科学院上海兽医研究所，上海 200241;中国农业科学院上海兽医研究所，上海 200241;中国农业科学院上海兽医研究所，上海 200241;中国农业科学院上海兽医研究所，上海 200241;中国农业科学院上海兽医研究所，上海 200241;中国农业科学院上海兽医研究所，上海 200241;中国农业科学院上海兽医研究所，上海 200241;华中农业大学动物医学院，湖北 武汉 430070;中国农业科学院上海兽医研究所，上海 200241 |
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| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划 (863计划) (No. 2011AA10A208)，国际合作项目 (No. 2010DF33920)，中央科研院所公益性基础科研业务费项目 (No. 2011JB03)，国家自然科学基金 (No. 31100121)，NSFC-广联合基金项目 (No. U0931003) 资助。 |
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| 摘 要： | 以高致病性猪繁殖与呼吸综合征弱毒疫苗的感染性分子克隆(rHuN4-F112)作为载体,将O型口蹄疫病毒(FMDV)VP1基因的421~480nt(141~160aa)和598~639nt(200~213aa)两优势保护性抗原表位串联成的目的基因,通过突变PCR的方法插入Nsp2中的508~532位缺失区域,经体外转录后转染至BHK-21细胞中培养36 h,将上清接种至MARC-145细胞中培养,并在MARC-145细胞中连续传代,拯救重组病毒。经RT-PCR扩增,MluⅠ酶切及测序验证,结果表明插入的外源基因及人为突变的MluⅠ分子标记都正确,说明重组病毒拯救成功,且该重组病毒能够在MARC-145细胞中稳定传代,将此重组病毒命名为rPRRSV-F112-O/VP1ep。rPRRSV-F112-O/VP1ep能够在MARC-145细胞上引起明显的细胞病变,间接免疫荧光检测表明外源基因在该病毒中成功获得了表达。经过生物学特性分析,该病毒的TCID50=-log10-6.75/0.1 mL,且在MARC-145细胞中整体生长速度与其亲本病毒rHuN4-F112(△508-532)相似,但明显高于rHuN4-F112病毒。
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| 关 键 词： | 猪繁殖与呼吸综合症病毒 O型口蹄疫病毒 感染性分子克隆 重组病毒 |
| 收稿时间： | 2012-08-09 |
Construction and identification of a recombinant PRRSV expressing protective antigens of type O foot-and-mouth disease virus |
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| Wu Tong,Yanzhao Xu,Yanjun Zhou,Yifeng Jiang,Shanrui Zhang,Yaxin Wang,Jianping Zhu,Lingxue Yu,Jing Sun,Huanchun Chen and Guangzhi Tong. Construction and identification of a recombinant PRRSV expressing protective antigens of type O foot-and-mouth disease virus[J]. Chinese journal of biotechnology, 2012, 28(12): 1431-1440 |
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| Authors: | Wu Tong Yanzhao Xu Yanjun Zhou Yifeng Jiang Shanrui Zhang Yaxin Wang Jianping Zhu Lingxue Yu Jing Sun Huanchun Chen Guangzhi Tong |
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| Affiliation: | Shanghai Veterinary Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Shanghai 200241, China; College of Veterinary Medicine, Huazhong Agricultural University, Wuhan 430070, Hubei, China;Shanghai Veterinary Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Shanghai 200241, China;Shanghai Veterinary Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Shanghai 200241, China;Shanghai Veterinary Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Shanghai 200241, China;Shanghai Veterinary Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Shanghai 200241, China;Shanghai Veterinary Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Shanghai 200241, China;Shanghai Veterinary Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Shanghai 200241, China;Shanghai Veterinary Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Shanghai 200241, China;Shanghai Veterinary Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Shanghai 200241, China;College of Veterinary Medicine, Huazhong Agricultural University, Wuhan 430070, Hubei, China;Shanghai Veterinary Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Shanghai 200241, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) foot and mouth disease virus of type O infectious cloning reorganization of virus |
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