嗜热栖热菌HB 8耐热α-葡萄糖苷酶的提纯和性质

嗜热栖热菌HB 8(Thermus thermophilus<.I> H8 8 )的耐热α-葡萄糖苷酶(α-glucosidaseEC．.2.1.20)经硫酸铵分步沉淀、DEAE-纤维素柱层析和垂直板制备凝胶电泳提纯，经盘状凝胶电泳鉴定为单一区带，比活提高17倍。酶作用最适温度80℃，最适pH5．8，分子量67000，等电点Pl为4.5。该酶能够水解对硝基酚α--D-葡萄糖苷(PNPG)、蔗糖和麦芽糖，但不水解纤维二糖、蜜二糖、可溶性淀粉。酶作用于PNPG的米氏常数(Km)为0.4mmol／L，最大反应速度Vmax为0.29umol·nmin-1·mg-1。金属离子Mg2+、Mn2+、Ca2+和Ba2+对酶有激活怍用，Hg2+和Cu2+有强烈抑制作用。酶表现出极好的热稳定性，在90℃保温10小时后，仍保留90％的原始酶活力，在95℃的失活半寿期(t1/2)为108分钟．经蛋白质侧链化学修饰研究表明，羧基和组氨酸残基为其表现话力所必需。