| 利用CRISPR/Cas9n double nick系统构建人DNAH2基因敲除的U2OS细胞株 |
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| 引用本文： | 常丽贤,孙聪聪,陈晓娟,杨文钰,张家源,张英弛,袁卫平,竺晓凡. 利用CRISPR/Cas9n double nick系统构建人DNAH2基因敲除的U2OS细胞株[J]. 生物工程学报, 2017, 33(2): 284-293 |
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| 作者姓名： | 常丽贤 孙聪聪 陈晓娟 杨文钰 张家源 张英弛 袁卫平 竺晓凡 |
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| 作者单位： | 中国医学科学院 北京协和医学院 血液病医院血液学研究所，天津 300020,中国医学科学院 北京协和医学院 血液病医院血液学研究所，天津 300020,中国医学科学院 北京协和医学院 血液病医院血液学研究所，天津 300020,中国医学科学院 北京协和医学院 血液病医院血液学研究所，天津 300020,中国医学科学院 北京协和医学院 血液病医院血液学研究所，天津 300020,中国医学科学院 北京协和医学院 血液病医院血液学研究所，天津 300020,中国医学科学院 北京协和医学院 血液病医院血液学研究所，天津 300020,中国医学科学院 北京协和医学院 血液病医院血液学研究所，天津 300020 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金 (Nos. 81500156, 81470339, 81470280, 81300394)，天津市科技计划项目 (No. 12ZCDZSY18100) 资助。 |
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| 摘 要： | 基于CRISPR/Cas9n double nick技术构建人DNAH2(Homo sapiens dynein,axonemal,heavy chain 2)基因敲除的U2OS稳定细胞株,旨在研究DNAH2基因的生物学功能。首先设计并合成A、B两个sg RNA(Single guide RNA)以及各自的互补链,退火连接形成DNAH2 sg RNA-A、B双链,再分别与带有BbsⅠ粘性末端的p X462线性载体相连,形成p X462-DNAH2-A、p X462-DNAH2-B重组真核表达质粒。质粒共转染至U2OS细胞后,加入嘌呤霉素,以有限稀释法获得阳性单克隆细胞株,再以蛋白印迹实验检测DNAH2蛋白的表达,最后通过PCR-基因测序技术分析突变特点。结果显示A、B sg RNA双链成功插入p X462载体,U2OS-DNAH2-KO单克隆细胞株中DNAH2蛋白不表达,DNAH2基因发生移码突变,从而证实利用CRISPR/Cas9n double nick系统成功构建人DNAH2基因敲除的U2OS稳定细胞株,为研究DNAH2基因提供有利工具。
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| 关 键 词： | DNAH2，CRISPR/Cas9n，基因敲除，稳定细胞株 |
| 收稿时间： | 2016-07-21 |
Knocking out of human DNAH2 gene in U2OS cells by CRISPR/Cas9n double nick system |
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| Lixian Chang,Congcong Sun,Xiaojuan Chen,Wenyu Yang,Jiayuan Zhang,Yingchi Zhang,Weiping Yuan and Xiaofan Zhu. Knocking out of human DNAH2 gene in U2OS cells by CRISPR/Cas9n double nick system[J]. Chinese journal of biotechnology, 2017, 33(2): 284-293 |
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| Authors: | Lixian Chang Congcong Sun Xiaojuan Chen Wenyu Yang Jiayuan Zhang Yingchi Zhang Weiping Yuan Xiaofan Zhu |
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| Affiliation: | Institute of Hematology and Blood Diseases, Hospital Chinese Academy of Medical Sciences & Peking Union Medical College, Tianjin 300020, China,Institute of Hematology and Blood Diseases, Hospital Chinese Academy of Medical Sciences & Peking Union Medical College, Tianjin 300020, China,Institute of Hematology and Blood Diseases, Hospital Chinese Academy of Medical Sciences & Peking Union Medical College, Tianjin 300020, China,Institute of Hematology and Blood Diseases, Hospital Chinese Academy of Medical Sciences & Peking Union Medical College, Tianjin 300020, China,Institute of Hematology and Blood Diseases, Hospital Chinese Academy of Medical Sciences & Peking Union Medical College, Tianjin 300020, China,Institute of Hematology and Blood Diseases, Hospital Chinese Academy of Medical Sciences & Peking Union Medical College, Tianjin 300020, China,Institute of Hematology and Blood Diseases, Hospital Chinese Academy of Medical Sciences & Peking Union Medical College, Tianjin 300020, China and Institute of Hematology and Blood Diseases, Hospital Chinese Academy of Medical Sciences & Peking Union Medical College, Tianjin 300020, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | DNAH2 CRISPR/Cas9n knock-out stable cell line |
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