細菌無細胞酶劑的研究 Ⅰ.一種簡便高效的細菌磨及其在製備大腸桿菌無細胞酶劑上的应用

本文報告了一種簡便高效的細菌磨,其主要構成部分包括一段横置的磨沙硬質滾筒和凹面瓷座。用5,000×g轉速,20分鐘離心收集的大腸桿菌漿作試驗。這種菌漿含水量約為乾菌重的5倍。加入1.3—1.5倍重的玻璃粉(顆粒小於3μ),混合均匀,研磨20—30秒,細菌裂碎率保證在99.99％以上。 將研磨所得混合物懸浮於磷酸鹽緩衝劑中,離心分離得到全提取液。全提取液再以20,000×g轉速,2小時離心分離,將酶劑分為澄清提取液和從碎菌沉澱製成的碎菌懸浮液兩部分。後者所殘留的活菌的氮約佔全氮的10~(-3)—10~(-4)％。利用同一批培養出來的細菌各次研磨製得的酶劑,其酶活力的可重複性程度很高,以琥珀酸氧化酶系的活力來說,各次平均離差範圍僅±10％。不需要加任何輔酶輔基,這兩部分酶劑都能够直接利用空氣中的氧來氧化琥珀酸、L-蘋果酸、L-乳酸、甲酸。澄清提取液部分還可以氧化L-谷氨酸、L-門冬氨酸、延胡索酸和乙醇,並且當它和碎菌部分酶劑混合時,除琥珀酸、甲酸和L-乳酸外對其他底質的氧化活力都大為提高。