| 重组hIL-12病毒在Sf9细胞传代中遗传稳定性的研究 |
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| 引用本文： | 涂海军,孟小林,徐进平,鲁伟,王健.重组hIL-12病毒在Sf9细胞传代中遗传稳定性的研究[J].中国病毒学,2004,19(2):141-145. |
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| 作者姓名： | 涂海军 孟小林 徐进平 鲁伟 王健 |
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| 作者单位： | 武汉大学病毒研究所,湖北武汉,430072 |
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| 基金项目： | 湖北省科技厅"十五"重点攻关项目(2001AA304B05) |
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| 摘 要： | 将含重组白细胞介素12(hIL-12)的杆状病毒(Ac-hIL12)经空斑纯化后,在草地贪夜蛾Sf9细胞中进行连续无稀释传代到P55代,收集被P15、P25、P35、P45、P55代重组病毒感染的细胞,抽提胞内病毒(ICV)DNA.根据重组病毒构建的原理,在P35 cDNA和P40 cDNA的3′末段设计一对引物进行PCR,扩增出了包括P35 cDNA、Polyhedrin启动子、P10启动子和P40 cDNA序列在内的全长约2.0kb片段,克隆至T Vector进行序列测定后发现,在第P15、P25和P35代所扩增出的序列没有发生任何突变.但在P45代,P35cDNA中就有3个碱基发生了点突变(461T→C,517A→G以及630C→T),Polyhedrin启动子的+1位后插入了一个碱基T,P40 cDNA与P10启动子区(230bp)没有变化;而第P55代除了以上碱基突变以外,P10启动子区-168位的G替换突变为T, -136与-135位之间插入一个碱基T,以及-122位缺失一个碱基T.以上结果表明杆状病毒在体外细胞连续传代过程中可导致外源基因本身的突变.
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| 关 键 词： | 人白细胞介素12(hIL-12) 工程病毒 连续无稀释传代 遗传稳定性 |
| 文章编号： | 1003-5152(2004)02-0141-05 |
| 修稿时间： | 2003年10月28 |
Study on Heredity Stability of a Recombinant Baculovirus Expressing Human Interleukin-12 in Sf9 Cells during Serial and Undiluted Passages |
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