| GST-Smad4融合蛋白的表达与纯化 |
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| 引用本文： | 梅竹,杨予涛,徐志卿. GST-Smad4融合蛋白的表达与纯化[J]. 生物技术通报, 2013, 0(1): 134-138 |
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| 作者姓名： | 梅竹 杨予涛 徐志卿 |
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| 作者单位： | 首都医科大学基础医学院 |
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| 基金项目： | 国家“973”计划项目(2010CB912003);高等学校博士学科点专项科研基金项目(20101107120015);北京市属高等学校人才强教深化计划中青年骨干人才资助项目(PHR20110895);北京市优秀人才培养资助项目(2010D005018000010) |
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| 摘 要： | 旨在原核表达Smad4基因,纯化获得GST-Smad4融合蛋白。以人表皮HaCaT细胞的cDNA为模板,利用PCR扩增含有BamH I和SalI酶切位点的Smad4基因;然后将其克隆到pGEX-4T-1原核表达载体中,将正确的重组载体转入大肠杆菌BL21(DE3);用IPTG诱导表达,再利用MagneGST particles亲和纯化GST-Smad4融合蛋白;最后通过Western blot鉴定此融合蛋白。结果显示,成功构建pGEX-4T-1-Smad4原核表达载体;30℃条件下,0.2 mmol/L的IPTG能诱导出大量的可溶性GST-Smad4蛋白;经MagneGST particles纯化的GST-Smad4蛋白可被Smad4的抗体特异识别。纯化的GST-Smad4蛋白可用于后续的生物学研究。
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| 关 键 词： | Smad4 原核表达 蛋白纯化 |
Prokaryotic Expression and Purification of GST-Smad4 Protein |
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| Mei Zhu Yang Yutao Xu Zhiqing. Prokaryotic Expression and Purification of GST-Smad4 Protein[J]. Biotechnology Bulletin, 2013, 0(1): 134-138 |
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| Authors: | Mei Zhu Yang Yutao Xu Zhiqing |
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| Affiliation: | Mei Zhu Yang Yutao Xu Zhiqing(School of Basic Medical Sciences,Capital Medical University,Beijing 100069) |
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