| III型类人胶原蛋白在大肠杆菌重组表达及发酵制备 |
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| 引用本文： | 李瑛琦,龚劲松,许正宏,史劲松.III型类人胶原蛋白在大肠杆菌重组表达及发酵制备[J].微生物学通报,2020,47(12):4164-4171. |
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| 作者姓名： | 李瑛琦 龚劲松 许正宏 史劲松 |
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| 作者单位： | 1 江南大学药学院 糖化学与生物技术教育部重点实验室 江苏 无锡 214122;2 江南大学生物工程学院 粮食发酵工艺与技术国家工程实验室 江苏 无锡 214122 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(21978116) |
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| 摘 要： | 【背景】胶原蛋白广泛应用于日用化工及生物医药中，相比传统方法，基因工程方法制备胶原蛋白具有避免病毒隐患、产量高等优点，逐步受到广泛关注。【目的】获得III型类人胶原蛋白基因，实现大肠杆菌中的异源表达。【方法】以人III型胶原蛋白α1链为模板，(Gly-X-Y)为最小研究单位，优选亲水性氨基酸，设计目标基因kit，构建重组大肠杆菌(Escherichia coli) pET-28a(+)-kit/BL21(DE3)，并对其结构进行表征。【结果】类人胶原蛋白基因kit成功在大肠杆菌体系中表达，表达量约为0.53 g/L，7 L发酵罐上补料发酵后其最大表达量提高至3.02 g/L，亲和层析纯化类人胶原蛋白纯度约为91%，对其进行N端测序、氨基酸分析、质谱分析及圆二色谱分析，确定类人胶原蛋白成功表达。【结论】类人胶原蛋白的成功表达为未来规模化制备及其在日用化工及生物医药行业的应用奠定了基础。
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| 关 键 词： | 大肠杆菌，III型类人胶原蛋白，克隆表达，结构表征 |
Recombinant expression and fermentation of type III human-like collagen in Escherichia coli |
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| LI Ying-Qi,GONG Jin-Song,XU Zheng-Hong,SHI Jin-Song.Recombinant expression and fermentation of type III human-like collagen in Escherichia coli[J].Microbiology,2020,47(12):4164-4171. |
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| Authors: | LI Ying-Qi GONG Jin-Song XU Zheng-Hong SHI Jin-Song |
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| Institution: | 1 Key Laboratory of Carbohydrate Chemistry and Biotechnology, Ministry of Education; School of Pharmaceutical Sciences, Jiangnan University, Wuxi, Jiangsu 214122, China;2 National Engineering Laboratory for Cereal Fermentation Technology, School of Biotechnology, Jiangnan University, Wuxi, Jiangsu 214122, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Escherichia coli Type III human-like collagen Cloning and expression Structural characterization |
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