| 表达结核分枝杆菌CFP10基因的重组腺病毒对A549细胞炎性因子的影响 |
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| 引用本文： | 王健宏,徐兆坤,李武.表达结核分枝杆菌CFP10基因的重组腺病毒对A549细胞炎性因子的影响[J].微生物学杂志,2020(5):82-88. |
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| 作者姓名： | 王健宏 徐兆坤 李武 |
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| 作者单位： | 1.宁夏大学 西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室，宁夏 银川 750021；2.宁夏大学 生命科学学院，宁夏 银川 750021 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目（31760724;32060799）；中国科学院“西部之光”计划项目（XAB2017AW08）；宁夏自然基金项目（2020AAC03110） |
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| 摘 要： | 通过构建表达结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis,Mtb）CFP10基因的重组腺病毒，探讨CFP10蛋白对A549细胞炎性因子表达的影响。采用酶切、连接的方法将CFP10编码基因插入到腺病毒穿梭质粒pShuttle-AdV4中，构建重组穿梭质粒pShuttle-AdV4-CFP10，重组穿梭质粒经测序验证后和骨架质粒pGP-Ad-Pac Vector经限制性内切酶PacⅠ酶切线性化后共转染至HEK 293A细胞中进行病毒包装，获得重组腺病毒AdV4-CFP10,经定量PCR和Western blot验证后进行病毒扩增，CsCl密度梯度离心纯化获得高纯度的重组腺病毒。AdV4-CFP10感染Ⅱ型肺泡上皮细胞A549，利用荧光定量PCR和ELISA技术检测A549细胞中细胞因子IL-1α、IL-6、IL-8和TNF-α等的表达水平，初步探究CFP10对A549细胞炎性因子分泌的影响。成功构建了表达结核分枝杆菌CFP10基因的重组腺病毒AdV4-CFP10，AdV4-CFP10转染至A549细胞后，与空病毒相比，过表达CFP10显著上调A549细胞炎性因子的分泌水平。为进一步深入研究结核分枝杆菌CFP10蛋白对A549细胞炎性反应的调控机制提供参考。
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| 关 键 词： | 结核分枝杆菌 结核病 重组腺病毒 CFP10 炎性因子 疫苗 |
The Effects of a Recombinant Adenovirus Expressing CFP10 Gene of Mycobacterium tuberculosis on Inflammatory Factors to A549 Cells |
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| WANG Jian-hong,XU Zhao-kun,LI Wu.The Effects of a Recombinant Adenovirus Expressing CFP10 Gene of Mycobacterium tuberculosis on Inflammatory Factors to A549 Cells[J].Journal of Microbiology,2020(5):82-88. |
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| Authors: | WANG Jian-hong XU Zhao-kun LI Wu |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Mycobacterium tuberculosis(Mtb) tuberculosis recombinant adenovirus CFP10 inflammatory factor vaccine |
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