| 菊粉酶基因的异源表达、分离纯化及酶学性质 |
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| 引用本文： | 李益民,高教琪,袁文杰,相瑞娟,侯胜博. 菊粉酶基因的异源表达、分离纯化及酶学性质[J]. 生物工程学报, 2015, 31(5): 670-681 |
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| 作者姓名： | 李益民 高教琪 袁文杰 相瑞娟 侯胜博 |
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| 作者单位： | 大连理工大学生命科学与技术学院，辽宁 大连 116024,大连理工大学生命科学与技术学院，辽宁 大连 116024,大连理工大学生命科学与技术学院，辽宁 大连 116024,大连理工大学生命科学与技术学院，辽宁 大连 116024,大连理工大学生命科学与技术学院，辽宁 大连 116024 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金 (No. 21106016)，中央高校基本业务费 (No. DUT14LK33)资助。 |
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| 摘 要： | 为进一步提高菊粉酶在生物技术领域的应用,研究了来源于马克斯克鲁维酵母Kluyveromyces marxianus YX01的菊粉酶性质。通过在毕赤酵母GS115宿主细胞中异源表达该菊粉酶基因(inu),获得了一种外切型菊粉酶,经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)验证其分子量为86.0 k Da。进一步在该菊粉酶上增加6个His标签,采用聚乙二醇(PEG)20 000透析浓缩和Ni-NTA Agarose静态亲和吸附作用的方法,完成菊粉酶的分离纯化,纯化倍数和酶回收率分别为3.6和33.1%。比较发现粗酶液与纯酶的酶学性质相似,且菊粉酶的最适反应温度为60℃,最适p H值为4.62,并测得该酶的Km和Vmax值,以菊粉为底物时,Km和Vmax值分别为80.53 g/L和4.49 g/(L·min);以蔗糖底物时,Km和Vmax值分别为183.10 g/L和20.20 g/(L·min)。金属离子Mn2+、Ca2+、Cu2+、Zn2+和Fe2+对酶活力具有不同程度的抑制作用,其中Cu2+、Zn2+和Fe2+的抑制作用最为显著。这些研究为进一步提高菊粉酶在工业化的应用奠定了基础。
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| 关 键 词： | 马克斯克鲁维，菊粉酶，重组表达，分离纯化，酶学性质 |
| 收稿时间： | 2014-09-28 |
Heterologous expression, purification and characterization of exo-inulinase from Kluyveromyces marxianus YX01 |
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| Yimin Li,Jiaoqi Gao,Wenjie Yuan,Ruijuan Xiang and Shengbo Hou. Heterologous expression, purification and characterization of exo-inulinase from Kluyveromyces marxianus YX01[J]. Chinese journal of biotechnology, 2015, 31(5): 670-681 |
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| Authors: | Yimin Li Jiaoqi Gao Wenjie Yuan Ruijuan Xiang Shengbo Hou |
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| Affiliation: | School of Life Science and Biotechnology, Dalian University of Technology, Dalian 116024, Liaoning, China,School of Life Science and Biotechnology, Dalian University of Technology, Dalian 116024, Liaoning, China,School of Life Science and Biotechnology, Dalian University of Technology, Dalian 116024, Liaoning, China,School of Life Science and Biotechnology, Dalian University of Technology, Dalian 116024, Liaoning, China and School of Life Science and Biotechnology, Dalian University of Technology, Dalian 116024, Liaoning, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Kluyveromyces marxianus inulinase heterologous expression purification enzymatic properties |
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