| 睾酮假单胞菌3α-羟类固醇脱氢酶基因的质粒载体构建及表达 |
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| 引用本文： | 张国华,徐国宾,刘英民,夏铁安.睾酮假单胞菌3α-羟类固醇脱氢酶基因的质粒载体构建及表达[J].生物化学与生物物理进展,2002,29(6):966-969. |
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| 作者姓名： | 张国华 徐国宾 刘英民 夏铁安 |
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| 作者单位： | 1. 北京大学第一医院检验科,北京,100034
2. 青岛市环保局崂山分局,青岛,266101 |
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| 摘 要： | 从土壤中分离睾酮假单胞菌，提取其基因组DNA，PCR扩增3α-羟类固醇脱氢酶（3α-hsd）基因，将扩增产物用NdeⅠ/BamHⅠ消化，切下目的基因片段克隆到质粒pET-15b中构建重组pET-15b.将重组pET-15b转化入E.coli DH5α中，经酶谱分析和测序，鉴定出正确的重组质粒pET-15b.将重组pET-15b转化入宿主菌E.coli BL21(DE3) pLysS中，用硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达.提取细菌总蛋白质进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)分析并测定酶活性.粗提物中酶活性高达2.45×105 U/L.利用重组蛋白中的6个组氨酸(His)组成的“标签”进行亲和层析，经一步金属螯合亲和层析纯化后，重组蛋白在SDS-PAGE上呈现出均一的单一条带，回收率达68%.活性和纯度均较高的目的蛋白3α-HSD的获得，为血清总胆汁酸酶循环法测定奠定了基础.
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| 关 键 词： | 睾酮假单胞菌，3α-羟类固醇脱氢酶，重组质粒，基因表达，胆汁酸 |
| 收稿时间： | 7/2/2002 12:00:00 AM |
| 修稿时间： | 2002年7月2日 |
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