人乳头瘤病毒16型变异株E7蛋白在HeLa细胞中的表达及亚细胞定位 |
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引用本文: | 刘金花,俞娟,许蓓妮,姚军,左泽华,赵旻,伍欣星.人乳头瘤病毒16型变异株E7蛋白在HeLa细胞中的表达及亚细胞定位[J].国外医学:分子生物学分册,2007,4(1):1-5. |
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作者姓名: | 刘金花 俞娟 许蓓妮 姚军 左泽华 赵旻 伍欣星 |
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作者单位: | 武汉大学医学院病毒学研究所分子病毒学研究室,武汉市430071 |
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摘 要: | 目的构建增强绿色荧光蛋白(EGFP)-人乳头瘤病毒16型变异株E7(HPV16-HBE7)重组质粒pEGFP-HBE7,研究HPV16-HBE7蛋白亚细胞定位,为进一步了解其生物学功能奠定基础。方法采用分子克隆技术,将HPV16-HBE7基因克隆在pEGFP—Cl表达载体上,用脂质体法导入宫颈癌细胞中;Western印迹检测HBE7蛋白的表达;同时借助免疫荧光技术和EGFP-融合蛋白技术,采用激光共聚焦显微镜观察HBE7蛋白的亚细胞定位。结果重组质粒经PCR、酶切和测序鉴定,其目的片段大小、插入位点和核苷酸序列完全正确;结果表明,转染细胞HBE7蛋白的相对表达量其胞浆明显多于胞核;各个时间段HBE7蛋白均以胞浆分布为主,绿色荧光密集点状分布于细胞浆内,而野生株E7(WE7)蛋白分布在核内。结论人乳头瘤病毒16型变异株E7蛋白主要分布在细胞浆内,以胞浆为主的分布可能和HBE7基因发生突变后丢失核定位信号有关。
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关 键 词: | 人乳头瘤病毒 人乳头瘤病毒16型变异株E7 亚细胞定位 核定位信号 激光共聚焦 |
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