| 南极深海沉积物宏基因组DNA中低温脂肪酶基因的克隆、表达及性质分析 |
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| 引用本文： | 张金伟,曾润颖. 南极深海沉积物宏基因组DNA中低温脂肪酶基因的克隆、表达及性质分析[J]. 生物化学与生物物理进展, 2006, 33(12): 1207-1214 |
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| 作者姓名： | 张金伟 曾润颖 |
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| 作者单位： | 国家海洋局第三海洋研究所海洋生物遗传资源重点实验室,厦门,361005 |
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| 基金项目： | 国家自然科学青年基金资助项目(40406029)~~ |
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| 摘 要： | 从南极普利兹湾深海900米深的沉积物中提取获得宏基因组DNA,并通过设计引物,从中克隆到全长为948bp的低温脂肪酶(lip3)开放阅读框完整序列,该基因编码一个由315个氨基酸残基组成、预计分子质量为34.557ku酶蛋白(Lip3);氨基酸序列上的GFGNS(GXGXS)和G-N-S-M-G(GXSXG)在许多脂肪酶中有很高的保守性,它们是水解机制所必需的序列,也是丝氨酸水解酶中最保守的序列.构建了lip3基因重组表达载体,并在大肠杆菌中获得表达,采用镍离子亲和层析柱对表达的酶蛋白Lip3进行纯化,得到约35ku蛋白条带,酶学性质的分析表明,该酶的最适作用温度为25℃,在0℃时表现为最高活力的22%,最适pH值为8.0,对热敏感,35℃热处理60min剩余酶活为10%,以硝基苯棕榈酸酯为底物,Lip3的酶促反应常数Km值随着反应温度的升高而升高,是典型的低温酶.
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| 关 键 词： | 南极深海沉积物 宏基因组 低温脂肪酶 克隆与表达 |
| 收稿时间： | 2006-05-19 |
| 修稿时间： | 2006-08-13 |
Cloning, Expression and Characterization of The Cold Active Lipase (Lip3) From Metagenomic DNA of an Antarctic Deep Sea Sediment |
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| Zhang Jin-Wei and Zeng Run-Ying. Cloning, Expression and Characterization of The Cold Active Lipase (Lip3) From Metagenomic DNA of an Antarctic Deep Sea Sediment[J]. Progress In Biochemistry and Biophysics, 2006, 33(12): 1207-1214 |
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| Authors: | Zhang Jin-Wei and Zeng Run-Ying |
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| Affiliation: | Key Laboratory of Marine Biogenetic Resources, State Oceanic Administration, Xiamen 361005, China;Key Laboratory of Marine Biogenetic Resources, State Oceanic Administration, Xiamen 361005, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Antarctic deep sea sediment metagenome cold active lipase cloning and expression |
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