Production and stabilization of cellulases fromTrichoderma reesei

Summary Production of exoglucanase and endoglucanase in batch culture ofT. reesei QM 9414 was growth-associated both in lactose and leached beet pulp media. Endoglucanase remained stable whilst the organism was in the stationary phase but exoglucanase activityy decreased sharply at the onset of the stationary phase. Addition of the protease inhibitor phenylmethylsulphonyl fluoride (PMSF) towards the end of growth produced complete protection toward protease inactivation, exoglucanase being stabilized even in prolonged stationary phase. The stability of exoglucanase in the presence or absence of mycelium, with and without PMSF addition, showed that endogenous cell-free and cell-associated proteases weree responsible for exoglucanase inactivation in the stationary phase. Inactivation of exoglucanase depended on the physiological stage of the cultures, the enzyme remaining stable as long as the culture was in an active growth phase.

---

Resumen La producción de exoglucanase y endoglucanasa deT. reesei QM 9414 en cultivo por lotes en medios con lactosa y coseta agotada de remolacha como fuentes de carbono, fue asociada al crecimiento. La endoglucanasa permaneció estable en fase estacionaria, pero la actividad de exoglucanase disminuyó drásticamente al entrar el cultivo en dicha fase. La adición del inhibidor de proteasas PMSF hacia el final de la fase de crecimiento provocó la total inactivación de las proteasas producidas, lográndose estabilizar la exoglucanasa aún en prolongada fase estacionaria. Se analizó la estabilidad de exoglucanasa en presencia y ausencia de micelio, con y sin adición de PMSF; los resultados muestran que proteasas endogenas extracelulares y asociadas a la célula son responsables de la inestabilidad de la exoglucanasa en fase estacionaria. La inactivación de la exoglucanasa depende del estado fisiológico del cultivo, ya que la enzima permanece estable mientras el cultivo se encuentra en crecimiento.

---

Résumé La production d'exoglucanase et d'endoglucanase dans les cultures deT. reesei QM 9414 en milieu non renouvelé est associée à la croissance tant du lactose que du jus d'extraction de la pulpe de betterave. L'endo-glucanase reste stable tant que le microorganisme est dans sa phase stationnaire de croissance tandis que l'activité exoglucanasique décroit rapidement dès le début de cette phase stationnaire. L'ajour du fluorure de phenylmethylsulfonate (PMSF), un inhibiteur protéolytique, vers la fin de la croissance a exercé une protection complète contre l'inactivation par la protéase: l'exoglucanase était protégée dans ces conditions même en phase stationnaire prolongée. La stabilité de l'exoglucanase en présence ou en absence de mycelium, avec ou sans ajout de PMSF démontre la responsabilité des exo-protéases endogènes solubles et de protéases associées aux cellules dans l'inactivation de l'exoglucanase dans la phase stationnaire. L'inactivation de l'exoglucanase dépend de l'état physiologique des cultures. En effet, l'enzyme reste stable aussi longtemps que la culture est en phase active de croissance.

---

---

Based on a paper presented at the First Latin American Congress on Biotechnology, Tucumán, Argentina, October 4–8, 1987.