| 摘 要： | 为探明大弹涂鱼(Boleophthalmus pectinirostris)在氨氮环境适应过程中的氨转化及代谢机制,通过氨氮(8 mmol/L NH4Cl)胁迫的方法对大弹涂鱼进行了72 h急性实验;利用酶活性测定方法检测了氨代谢相关酶:谷氨酰胺合成酶(Glutamine synthetase,GS)活性及血氨浓度;酶联免疫技术检测氨代谢协同转运蛋白:碳酸酐酶(Carbonic anhydrase,CA)、钠氢交换蛋白3(Na+/H+exchanger,NHE3)表达水平;运用qPCR技术测定急性氨氮胁迫下大弹涂鱼氨代谢相关基因:GS、CA15、NHE,以及氨转运蛋白(Ammonium transporter Rh type C-1,Rhcg1)基因mRNA的相对表达变化情况。结果表明:在急性氨氮胁迫下,大弹涂鱼血氨浓度呈先上升(12 h)后下降至平稳状态的变化趋势。肝脏GS基因表达量在12 h和48 h显著上升,酶活性在24 h显著上升。鳃中NHE3蛋白表达水平与GS活性变化趋势相同,而CA蛋白水平分别在胁迫后12 h和48 h显著上升。排氨相关基因CA15,NHE,Rhcg1的表达量在氨氮胁迫下均有不同程度的上调,其中NHE基因最早(24 h)上调,而CA15和Rhcg1在48 h显著上升,表明其可能共同参与离子氨的排泄。研究结果表明,氨氮胁迫下大弹涂鱼主要通过两种途径进行氨代谢:(1)在肝脏GS的作用下合成无毒的谷氨酰胺以避免氨在体内过量积累;(2)在鳃组织CA作用下使CO2质子化提供H+,协同NHE3,Rhcg1蛋白复合体实现氨排泄过程。
|
