含PxIxIT模序烟曲霉KpsF基因作用初探

目的构建烟曲霉KpsF基因缺陷株,初步了解KpsF基因在烟曲霉生长及与钙调磷酸酶相互作用关系。方法PCR扩增烟曲霉KpsF基因及其上、下游各约1.0kb的DNA片段,以pyrG为筛选标记,原生质体法构建KpsF基因缺陷株ΔKpsF;观察ΔKpsF一般生长状况;实时荧光定量PCR方法检测Ku80(对照组)和ΔKpsF(实验组)在含有不同浓度CaCl_2的液体GMM培养基中钙调磷酸酶催化亚基(CnaA)相对表达水平。结果烟曲霉ΔKpsF和Ku80径向生长差异无统计学意义(P0.05);表型未见明显差别;ΔKpsF在10mmol/L CaCl_2GMM液体培养基的CnaA相对表达量显著高于对照组Ku80(P0.01),而100mmol/L CaCl_2的CnaA相对表达量却没有明显变化(P0.05)。结论 KpsF基因缺陷对烟曲霉的径向和表型生长没有明显影响,对CnaA表达量的影响与Ca~(2+)浓度有关。在低浓度Ca~(2+)条件下,KpsF可能参与对钙调磷酸酶的负反馈调节作用,而在高浓度的Ca~(2+)条件下,这种负反馈调节作用受到抑制。