| 双碱性氨基酸内肽酶末端剪切修饰显著提高酶活及其高效水解大豆蛋白 |
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| 引用本文： | 彭爱凤,张荣珍,徐岩. 双碱性氨基酸内肽酶末端剪切修饰显著提高酶活及其高效水解大豆蛋白[J]. 微生物学报, 2023, 63(9): 3602-3615 |
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| 作者姓名： | 彭爱凤 张荣珍 徐岩 |
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| 作者单位： | 江南大学生物工程学院 工业生物技术教育部重点实验室, 江苏 无锡 214122 |
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| 基金项目： | 国家重点研发计划(2018YFA0900302)；国家自然科学基金(31970045)；江苏省研究生科研与实践创新计划(1012050205205974)；国家轻工技术与工程一流学科(LITE2018-12)；高等学校学科创新引智计划(111-2-06) |
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| 摘 要： | 【目的】将酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)和毕赤亚库德里亚夫泽维(Pichia kudriavzevii)来源的双碱性氨基酸内肽酶基因sckex2和pkkex2克隆到大肠杆菌(Escherichia coli)BL21中，实现双碱性氨基酸内肽酶的异源表达，研究重组酶的酶学性质及其与碱性蛋白酶的协同高效水解大豆蛋白释放出小分子活性肽的作用。【方法】按照大肠杆菌的密码子偏好性，对S.cerevisiae和P.kudriavzevii的kex2基因进行优化，分析KEX2蛋白的非功能区域，对其C-末端、N-末端氨基酸进行剪切修饰获得4种突变酶基因sckex2?3、sckex2?4、pkkex2?3和pkkex2?4，构建在载体pGEX-6P-1上，转入E.coli BL21感受态细胞中，经DNA测序验证，获得重组菌株E.coli BL21/pGEX-ScKEX2?3、E.coli BL21/pGEX-ScKEX2?4、E.coli BL21/pGEX-PkKEX2?3和E.coli BL21/pGEX-PkKEX2?4。利用GST亲和层析柱和PreScission蛋...
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| 关 键 词： | 双碱性氨基酸内肽酶 大肠杆菌 酶学性质 大豆蛋白 活性肽 |
| 收稿时间： | 2023-01-10 |
| 修稿时间： | 2023-03-27 |
Terminal truncation improves the activity and soybean protein hydrolysis efficiency of dibasic endopeptidase |
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| PENG Aifeng,ZHANG Rongzhen,XU Yan. Terminal truncation improves the activity and soybean protein hydrolysis efficiency of dibasic endopeptidase[J]. Acta microbiologica Sinica, 2023, 63(9): 3602-3615 |
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| Authors: | PENG Aifeng ZHANG Rongzhen XU Yan |
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| Affiliation: | Key Laboratory of Industrial Biotechnology of Ministry of Education, School of Biotechnology, Jiangnan University, Wuxi 214122, Jiangsu, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | dibasic endopeptidase (KEX2) Escherichia coli enzymatic properties soybean protein active peptides |
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