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减毒李斯特菌载体运送HPV16 E7基因重组疫苗的构建及其生物学特性
引用本文:贾艳艳,殷月兰,谈卫军,段斐斐,潘志明,陈祥,焦新安.减毒李斯特菌载体运送HPV16 E7基因重组疫苗的构建及其生物学特性[J].生物工程学报,2016,32(5):683-692.
作者姓名:贾艳艳  殷月兰  谈卫军  段斐斐  潘志明  陈祥  焦新安
作者单位:扬州大学 江苏省人兽共患病重点实验室 江苏省动物重要疫病和人兽共患病防控协同创新中心,江苏 扬州 225009,扬州大学 江苏省人兽共患病重点实验室 江苏省动物重要疫病和人兽共患病防控协同创新中心,江苏 扬州 225009,扬州大学 江苏省人兽共患病重点实验室 江苏省动物重要疫病和人兽共患病防控协同创新中心,江苏 扬州 225009,扬州大学 江苏省人兽共患病重点实验室 江苏省动物重要疫病和人兽共患病防控协同创新中心,江苏 扬州 225009,扬州大学 江苏省人兽共患病重点实验室 江苏省动物重要疫病和人兽共患病防控协同创新中心,江苏 扬州 225009,扬州大学 江苏省人兽共患病重点实验室 江苏省动物重要疫病和人兽共患病防控协同创新中心,江苏 扬州 225009,扬州大学 江苏省人兽共患病重点实验室 江苏省动物重要疫病和人兽共患病防控协同创新中心,江苏 扬州 225009
基金项目:国家自然科学基金 (Nos. 31472193, 31101841),江苏高校优势学科建设工程项目资助。
摘    要:单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)是一种理想的肿瘤疫苗载体,本文旨在构建表达人乳头瘤状病毒(HPV)16型E7蛋白的减毒重组李斯特菌疫苗候选株并分析其生物学特性。利用同源重组技术将HPV16 E7基因定点整合至LMhly基因信号肽序列下游,获得减毒重组李斯特菌LM4△hly::E7,并对该重组菌进行生物学特性研究。实验结果表明,重组菌能够分泌表达具有免疫学活性的E7-LLO融合蛋白,大小约66 k Da;通过激光共聚焦扫描显微镜观察到重组菌能够在RAW264.7细胞胞内增殖。ELISA测定结果显示减毒重组菌能够诱导小鼠产生E7特异性抗体。重组菌在C57BL/6小鼠中LD50为3.863×10~9 CFU,低于亲本株4个数量级,通过组织切片观察到重组菌对小鼠肝脏及脾脏无明显病理变化。以上表明,本研究构建的分泌表达E7-LLO融合蛋白的减毒重组李斯特菌具有较好的安全性,为下一步研究其抗肿瘤作用提供了材料,并为研发宫颈癌的免疫治疗型候选疫苗奠定重要基础。

关 键 词:减毒单核细胞增生李斯特菌,人乳头瘤状病毒16型  E7蛋白,巨噬细胞系,安全性
收稿时间:2015/9/29 0:00:00

Construction and characterization of an attenuated recombinant Listeria monocytogenes vector vaccine delivering HPV16 E7
Institution:Jiangsu Co-Innovation Center for Prevention and Control of Important Animal Infectious Disease and Zoonoses, Jiangsu Key Laboratory of Zoonosis, Yangzhou University, Yangzhou 225009, Jiangsu, China,Jiangsu Co-Innovation Center for Prevention and Control of Important Animal Infectious Disease and Zoonoses, Jiangsu Key Laboratory of Zoonosis, Yangzhou University, Yangzhou 225009, Jiangsu, China,Jiangsu Co-Innovation Center for Prevention and Control of Important Animal Infectious Disease and Zoonoses, Jiangsu Key Laboratory of Zoonosis, Yangzhou University, Yangzhou 225009, Jiangsu, China,Jiangsu Co-Innovation Center for Prevention and Control of Important Animal Infectious Disease and Zoonoses, Jiangsu Key Laboratory of Zoonosis, Yangzhou University, Yangzhou 225009, Jiangsu, China,Jiangsu Co-Innovation Center for Prevention and Control of Important Animal Infectious Disease and Zoonoses, Jiangsu Key Laboratory of Zoonosis, Yangzhou University, Yangzhou 225009, Jiangsu, China,Jiangsu Co-Innovation Center for Prevention and Control of Important Animal Infectious Disease and Zoonoses, Jiangsu Key Laboratory of Zoonosis, Yangzhou University, Yangzhou 225009, Jiangsu, China and Jiangsu Co-Innovation Center for Prevention and Control of Important Animal Infectious Disease and Zoonoses, Jiangsu Key Laboratory of Zoonosis, Yangzhou University, Yangzhou 225009, Jiangsu, China
Abstract:
Keywords:attenuated Listeria monocytogenes  HPV16 E7  macrophage cell line  safety
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