| 苦荞FtPCS基因克隆、表达及酶活性初步分析 |
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| 引用本文： | 袁 勇,陈 鹏. 苦荞FtPCS基因克隆、表达及酶活性初步分析[J]. 西北植物学报, 2017, 37(3): 419-427 |
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| 作者姓名： | 袁 勇 陈 鹏 |
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| 作者单位： | (西北农林科技大学 生命科学学院，陕西杨陵 712100) |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(31171606); |
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| 摘 要： | 该研究以Pb~(2+)诱导的苦荞(Fagopyrum tataricum)叶片转录组数据为基础,通过RT-PCR克隆,获得苦荞植物络合素合酶(Phytochelatins,PCs)基因(FtPCS);采用无缝克隆构建原核表达载体pET28a-PCS,并通过反向-HPLC结合DTNB[5,5′-二硫代双(2-硝基苯甲酸)]柱后衍生的方法,对纯化的FtPCS重组蛋白在Pb~(2+)存在条件下的催化活性进行初步分析,为进一步揭示FtPCS基因在苦荞重金属富集和解毒过程中的机制奠定基础。结果表明:苦荞FtPCS基因组序列全长5 456bp,包括8个外显子和7个内含子;FtPCS基因ORF序列全长1 485bp,编码494个氨基酸,预测分子量为55.10kDa。可溶性分析表明,苦荞FtPCS基因在E.coli BL21Star(DE3)中以包涵体的形式表达,采用梯度透析复性并结合钴离子螯合层析的方法获得纯化的FtPCS重组蛋白,复性的FtPCS蛋白具有催化GSH生成PC化合物的活性,而且低浓度的Pb~(2+)对其催化活性具有激活作用。
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| 关 键 词： | 苦荞 络合素合酶 反向 HPLC 催化活性 |
Cloning, Expression and Activity Analysis of a Phytochelatin Synthase Gene from Fagopyrum tataricum |
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| YUAN Yong,CHEN Peng. Cloning, Expression and Activity Analysis of a Phytochelatin Synthase Gene from Fagopyrum tataricum[J]. Acta Botanica Boreali-Occidentalia Sinica, 2017, 37(3): 419-427 |
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| Authors: | YUAN Yong CHEN Peng |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Fagopyrum tataricum phytochelatin synthase reverse HPLC catalytic activity |
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