| 噬菌体展示 protein A 及 protein L Ig 结合单结构域随机组合文库及 Ig 亲和筛选 |
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| 引用本文： | 徐 容,沈毅珺,邓松华,蔡春晓,陈秋莉,贾建安,王锦红,潘 欣,潘 卫. 噬菌体展示 protein A 及 protein L Ig 结合单结构域随机组合文库及 Ig 亲和筛选[J]. 生物化学与生物物理进展, 2005, 32(6): 535-543 |
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| 作者姓名： | 徐 容 沈毅珺 邓松华 蔡春晓 陈秋莉 贾建安 王锦红 潘 欣 潘 卫 |
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| 作者单位： | 1. 安徽医科大学病理生理学教研室,合肥,230032
2. 第二军医大学基础医学部微生物学教研室,上海,200433 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目（30472050）. |
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| 摘 要： | Protein A 和 protein L 是细菌产生的两种结构和功能均不同的免疫球蛋白 (immunoglobulin ， Ig) 结合分子，在细菌的致病中起重要作用 . 用含 SacⅠ位点的特定引物 PCR 分别扩增制备 protein A 的 A 、 B 、 C 、 D 抗体结合结构域和 protein L 的 B3 抗体结合结构域，各结构域 DNA 片段经 SacⅠ酶切后，再随机连接形成各种不同长度的分子组合文库，将该文库呈现在噬菌体表面构建了噬菌体展示 Ig 结合分子单结构域随机组合文库，所建组合文库容量为 2.3×106个菌落形成单位，滴度为 4.1×1011TU/ml ， 包含各种单结构域片段，并以随机方式连接 . 用人 Ig 对该文库进行 4 轮亲和筛选，随机挑选 36 个代表性的阳性克隆进行序列测定分析表明，亲和筛选获得了多种非天然形式存在的新的 Ig 结合分子结构，其中 32 个克隆具有由 protein L 的单结构域和 protein A 的单结构域间隔重复排列而成的特征性 (MDPL-MDPA)n 结构 . 对噬菌体展示 Ig 结合分子单结构域随机组合文库的体外分子进化研究的尝试，为 Ig 结合分子的结构和功能研究提供了一新的途径，也为 Ig 结合分子的定向改造打下基础 .
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| 关 键 词： | 噬菌体展示，分子进化，结构域，组合文库， protein A ， protein L |
Phage Display of Random Combinatorial Libraries of Ig-binding Mono-domains of Protein A and Protein L and Ig Affinity creening |
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| XU Rong,SHEN Yi-Jun,DENG Song-Hu,CAI Chun-Xiao,CHEN Qiu-Li,JIA Jian-An,JIA Jian-An,PAN Xin and PAN Wei. Phage Display of Random Combinatorial Libraries of Ig-binding Mono-domains of Protein A and Protein L and Ig Affinity creening[J]. Progress In Biochemistry and Biophysics, 2005, 32(6): 535-543 |
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| Authors: | XU Rong SHEN Yi-Jun DENG Song-Hu CAI Chun-Xiao CHEN Qiu-Li JIA Jian-An JIA Jian-An PAN Xin PAN Wei |
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| Affiliation: | Department of Pathophysiology, Anhui Medical University, Hefei 230032, China;Department of Microbiology, College of Basic Medical Sciences, Second Military Medical University. Shanghai 200433, China;Department of Pathophysiology, Anhui Medical University, Hefei 230032, China;Department of Pathophysiology, Anhui Medical University, Hefei 230032, China;Department of Microbiology, College of Basic Medical Sciences, Second Military Medical University. Shanghai 200433, China;Department of Microbiology, College of Basic Medical Sciences, Second Military Medical University. Shanghai 200433, China;Department of Microbiology, College of Basic Medical Sciences, Second Military Medical University. Shanghai 200433, China;Department of Microbiology, College of Basic Medical Sciences, Second Military Medical University. Shanghai 200433, China;Department of Microbiology, College of Basic Medical Sciences, Second Military Medical University. Shanghai 200433, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | phage display molecular evolution Ig-binding domain combinatorial library protein A protein L |
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