| HLA-A*2402-BSP在大肠杆菌中的优化表达及其四聚体的制备和鉴定 |
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| 引用本文： | 贾仟涛,徐丽慧,李丰耀,查庆兵,何贤辉. HLA-A*2402-BSP在大肠杆菌中的优化表达及其四聚体的制备和鉴定[J]. 生物工程学报, 2007, 23(2) |
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| 作者姓名： | 贾仟涛 徐丽慧 李丰耀 查庆兵 何贤辉 |
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| 作者单位： | 暨南大学生命科学技术学院，组织移植与免疫实验中心，广州 510632;暨南大学生命科学技术学院，生物工程研究所，广州 510632;暨南大学生命科学技术学院，组织移植与免疫实验中心，广州 510632;暨南大学附属第一医院临床实验中心，广州 510632;暨南大学生命科学技术学院，组织移植与免疫实验中心，广州 510632 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金重点项目资助(No.30230350)；国家自然科学基金面上项目资助(No.30371651和30572199)。 |
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| 摘 要： | HLA-A*2402是中国人群中最常见的等位基因之一，为研究该基因型人群的人巨细胞病毒（HCMV）特异性细胞毒T细胞（CTL）免疫应答，需要制备负载相应抗原肽的HLA-A*2402四聚体。以RT-PCR方法克隆HLA-A*2402重链基因的cDNA，并构建了羧基端融合生物素化酶BirA底物肽(BSP)的HLA-A*2402重链胞外域融合蛋白（HLA-A*2402-BSP）的表达载体，但该载体不能在大肠杆菌(E. coli)中有效表达HLA-A*2402-BSP融合蛋白；通过对氨基端（N端）区域编码区的密码子进行优化，构建了同义突变的HLA-A*2402-BSP表达载体，融合蛋白在E. coli中获得了高效表达。进而制备了负载HLA-A*2402限制性HCMV pp65341-349抗原肽(QYDPVAALF, QYD)的可溶性HLA-A*2402-QYD单体分子和四聚体，获得的四聚体具有与HLA-A24+供者抗原特异性CTL的结合活性，特异性CTL的频率为总CD8+T细胞的0.09％～0.37％。这些结果为进一步研究HLA-A*2402限制性的特异性CTL免疫应答规律奠定基础。
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| 关 键 词： | 四聚体， HLA-A*2402， 巨细胞病毒， 密码子优化， 原核表达， 包涵体 |
Improved Expression of HLA-A*2402-BSP in Escherichia coli and Its Tetramer Preparation |
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| JIA Qian-Tao,XU Li-Hui,LI Feng-Yao,ZHA Qing-Bing and HE Xian-Hui. Improved Expression of HLA-A*2402-BSP in Escherichia coli and Its Tetramer Preparation[J]. Chinese journal of biotechnology, 2007, 23(2) |
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| Authors: | JIA Qian-Tao XU Li-Hui LI Feng-Yao ZHA Qing-Bing HE Xian-Hui |
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