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| HIV-1蛋白酶的表达、纯化及其抑制剂体外筛选方法的建立 | |
| 引用本文： | 王云华,王睿睿,杨柳萌,李健峰,徐维明,郑永唐.HIV-1蛋白酶的表达、纯化及其抑制剂体外筛选方法的建立[J].中国病毒学,2006,21(2):126-130. |
| 作者姓名： | 王云华 王睿睿 杨柳萌 李健峰 徐维明 郑永唐 |
| 作者单位： | 1. 中国科学院昆明动物研究所分子免疫药理学实验室,云南,昆明,650223;中国科学院研究生院,北京,100039 2. 中国科学院昆明动物研究所分子免疫药理学实验室,云南,昆明,650223 3. 中国医学科学院医学生物学研究所,云南,昆明,650231 |
| 基金项目： | 国家科技攻关项目;科技部专项基金;中国科学院知识创新工程项目;云南省自然科学基金;云南省科技计划 |
| 摘 要： | 从HIV-1 ⅢB病毒RNA经RT-PCR得到HIV-1蛋白酶编码序列,克隆到pet28a质粒中构建HIV-1蛋白酶表达载体.阳性克隆转染E.coli BL21 DE3,经IPTG诱导,蛋白酶以包涵体的形式表达,表达量占菌体总蛋白量的40%.包涵体经Triton X-100洗涤后溶解于8M尿素,溶解后的蛋白溶液经sephacyl s-200 H.R分子筛柱纯化后纯度达到90%以上,收集蛋白酶峰稀释复性并通过超滤进行浓缩.经检测,纯化的蛋白酶具有较高的活性.用荧光标记的蛋白酶底物检测不同浓度indinavir对蛋白酶活性的影响,表明该方法可以用于蛋白酶抑制剂的筛选. |
| 关 键 词： | 蛋白酶 表达 纯化 抑制剂 |
| 文章编号： | 1003-5125(2006)02-0126-05 |
| 修稿时间： | 2005年10月24 |
Expression and Purification of HIV-1 Protease and the Establishment of a Method for Protease Inhibitor Screening |
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| WANG Yun-hua,WANG Rui-rui,YANG Liu-meng,Li Jian-feng,XU Wei-ming,ZHENG Yong-tang.Expression and Purification of HIV-1 Protease and the Establishment of a Method for Protease Inhibitor Screening[J].Virologica Sinica,2006,21(2):126-130. | |
| Authors: | WANG Yun-hua WANG Rui-rui YANG Liu-meng Li Jian-feng XU Wei-ming ZHENG Yong-tang |
| Institution: | 1.1. Laboratory of Immunopharmacology, Kunming Institute of Zoology, Chinese Academy of Sciences, Kunming, Yunnan 650223,China2.Institute of Medical Biology, Chinese Academy of Medical Sciences, Kunming, Yunnan 650231，China3.Graduate School of Chinese Academy of Sciences, Beijing 100039, China |
| Abstract: | |
| Keywords: | HIV-1 |
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