抗菌肽CPIOA在大肠杆菌中的融合表达 |
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作者姓名: | 罗永平 张惠文 王小目 徐明恺 苏振成 张成刚 |
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作者单位: | [1]中国科学院沈阳应用生态研究所,沈阳110016 [2]中国科学院研究生院,北京100049 |
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摘 要: | CPIOA是一种由抗菌肽Indolicine经过序列改造,且对多数革兰氏阳性病源细菌具有较强抗菌活性的多肽序列。研究根据已报道的CP10A氨基酸序列,兼顾大肠杆菌密码子偏好性,设计CP10A的核苷酸序列,利用PCR技术合成相应的DNA序列,后克隆构建重组表达载体pET32a(+)-CP10A,转入大肠杆菌AIM94菌株。经IPTC诱导表达和15%SDS—PAGE电泳检测后发现产物以包涵体形式存在,且融合表达量占总蛋白的50%。在变性条件下经Ni—NTA亲合柱层析及复性,最终获得了较高纯度的可溶性重组蛋白。研究首次实现了CPl0A抗菌肽在大肠杆菌中的融合表达,为进一步研究其生物学活性及应用奠定了一定的基础,同时也为研究抗菌肽表达提供了一种方法。
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关 键 词: | CPIOA 克隆 大肠杆菌 表达 纯化 |
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