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Egr-1对APP基因表达的调控作用
引用本文:马琳,周瑜,李永玲,柴娟,贾中发,郭克,孙涛,崔建奇.Egr-1对APP基因表达的调控作用[J].中国细胞生物学学报,2015(1):39-46.
作者姓名:马琳  周瑜  李永玲  柴娟  贾中发  郭克  孙涛  崔建奇
作者单位:宁夏颅脑疾病重点实验室,省部共建国家重点实验室培育基地;宁夏医科大学基础医学院
基金项目:国家重点基础研究发展计划(973计划)(批准号:2012CB722408);国家自然科学基金(批准号:81260197)资助的课题~~
摘    要:该研究构建了含有APP启动子的荧光素酶报告质粒以及缺失突变的报告质粒,将该质粒与Egr-1真核表达载体p CDNA3-Egr-1共转染到HEK293与U87MG细胞中进行荧光素酶活性测定,以确定Egr-1对APP基因表达的调控作用。通过染色质免疫共沉淀实验(chromatin immunoprecipitation assay,Ch IP)和凝胶电泳迁移实验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)确定Egr-1蛋白在APP启动子上的结合部位,同时利用组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA(trichostatin A)和butyrate诱导内源性Egr-1的表达以及Egr-1抑制剂suramin来作用于细胞,通过蛋白免疫印迹分析(Western blot)检测Egr-1对APP蛋白表达的作用。结果显示,Egr-1蛋白在APP基因启动子上5′UTR区域有特异性的结合部位,去除该结合部位则Egr-1失去对APP基因启动子的调控作用,Ch IP和EMSA的结果也证实了该结合位点;通过HDAC抑制剂和suramin干扰内源性Egr-1的表达则显著影响了Egr-1对APP基因表达的调控作用。

关 键 词:Egr-1  淀粉样前体蛋白  阿尔茨海默病  基因表达调控
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