| 鸡痘病毒NX10株TK基因在病毒复制中不是完全非必需的 |
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| 引用本文： | 王曼曼,赵妍,张雪梅,刘胜旺.鸡痘病毒NX10株TK基因在病毒复制中不是完全非必需的[J].微生物学通报,2017,44(12):2914-2922. |
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| 作者姓名： | 王曼曼 赵妍 张雪梅 刘胜旺 |
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| 作者单位： | 1. 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 兽医生物技术国家重点实验室 禽呼吸道病创新团队黑龙江 哈尔滨 150069,1. 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 兽医生物技术国家重点实验室 禽呼吸道病创新团队黑龙江 哈尔滨 150069; 2. 东北农业大学动物科学技术学院 黑龙江 哈尔滨 150030,1. 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 兽医生物技术国家重点实验室 禽呼吸道病创新团队黑龙江 哈尔滨 150069,1. 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 兽医生物技术国家重点实验室 禽呼吸道病创新团队黑龙江 哈尔滨 150069 |
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| 基金项目： | 中国博士后科学基金面上项目(No. 2014M560245)；国家科技支撑计划项目(No. 2015BAD12B03，2015BAD12B05-05) |
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| 摘 要： | 【目的】禽痘病毒(FPV)是痘病毒科禽痘病毒属的成员。FPV因其基因组庞大,含有大量复制非必需区,目前作为活病毒载体在禽类和哺乳动物中广泛使用。重组位点的选择是禽痘病毒载体构建的先决条件,外源基因的插入不影响病毒复制是筛选插入位点的前提。因此,鉴定可供外源基因插入的复制非必需位点将为重组病毒的构建提供更多选择。本研究拟鉴定FPV NX10株胸苷激酶(TK)基因在病毒复制中的必要性。【方法】以TK基因作为靶基因,增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为筛选标记构建转移载体,FPV NX10株为亲本病毒,通过同源重组筛选重组病毒r FPV-ΔTK-EGFP。通过在CEF细胞培养物中添加5-溴脱氧尿苷(BUd R)验证TK基因在FPV复制中的作用。【结果】构建了转移载体p UC19-TK AB-EGFP。在转染后重组病毒克隆纯化过程中,蚀斑克隆中绿色荧光病变所占的比例逐渐增加,但在荧光蚀斑的边缘能观察到不带荧光病变的存在。对第9-15轮随机选取的蚀斑克隆的Western blot分析表明,重组病毒中插入的EGFP基因均能够正确表达,但PCR结果显示在重组病毒中始终存在野生型病毒。在细胞培养液中添加BUd R后,重组病毒不能继续生长。【结论】FPV NX10毒株TK基因在该病毒的复制中不是完全非必需的。
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| 关 键 词： | 鸡痘病毒，TK基因，重组病毒，复制非必需基因 |
Thymidine kinase gene of Fowlpox virus NX10 strain is partly essential in viral replication |
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| WANG Man-Man,ZHAO Yan,ZHANG Xue-Mei and LIU Sheng-Wang.Thymidine kinase gene of Fowlpox virus NX10 strain is partly essential in viral replication[J].Microbiology,2017,44(12):2914-2922. |
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| Authors: | WANG Man-Man ZHAO Yan ZHANG Xue-Mei and LIU Sheng-Wang |
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| Institution: | 1. Division of Avian Infectious Diseases, State Key Laboratory of Veterinary Biotechnology, Harbin Veterinary Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Harbin, Heilongjiang 150069, China,1. Division of Avian Infectious Diseases, State Key Laboratory of Veterinary Biotechnology, Harbin Veterinary Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Harbin, Heilongjiang 150069, China; 2. College of Animal Science and Technology, Northeast Agricultural University, Harbin, Heilongjiang 150030, China,1. Division of Avian Infectious Diseases, State Key Laboratory of Veterinary Biotechnology, Harbin Veterinary Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Harbin, Heilongjiang 150069, China and 1. Division of Avian Infectious Diseases, State Key Laboratory of Veterinary Biotechnology, Harbin Veterinary Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Harbin, Heilongjiang 150069, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Fowlpox virus TK gene Recombinant virus Replication non-essential gene |
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