布鲁氏菌BP26抗原制备及基于BP26的金标检测试纸的初步研究 |
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引用本文: | 孙田华,张祺,李朋伟,张正雷,王彩霞,张幸子,彭林峰,席仲兴,焦磊,王婷.布鲁氏菌BP26抗原制备及基于BP26的金标检测试纸的初步研究[J].微生物学免疫学进展,2022(5):16-20. |
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作者姓名: | 孙田华 张祺 李朋伟 张正雷 王彩霞 张幸子 彭林峰 席仲兴 焦磊 王婷 |
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作者单位: | 兰州生物制品研究所有限责任公司第三研究室甘肃省疫苗工程技术研究中心 |
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摘 要: | 目的 制备布鲁氏菌血清学优势抗原BP26的原核表达,对其进行鉴定,且进行基于BP26重组蛋白的布鲁氏菌抗体金标检测试纸的研究。方法 检索人用疫苗株布鲁氏菌bp26基因序列进行基因合成,克隆至pET30a(+)载体,构建重组质粒pET30a(+)-bp26,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,亲和层析纯化BP26重组蛋白,纯化后重组蛋白进行蛋白免疫印迹鉴定。胶体金标记BP26,以BP26重组蛋白和BP26兔多抗血清分别包被检测线和质控线,制成布鲁氏菌抗体金标检测试纸。结果 BP26重组蛋白在大肠埃希菌中成功表达,相对分子质量约为26 000,与预期相符。亲和层析纯化后得到纯度较高的BP26重组蛋白。Western blot实验证明,该蛋白可与布鲁氏菌抗体阳性兔血清产生特异性结合。用布鲁氏菌抗体金标检测试纸检测兔阳性血清,检测线和质控线均显色明显。结论 成功获得BP26重组蛋白,Western blot实验证明该蛋白具有良好的免疫反应性。研制的检测试纸成功检测出布鲁氏菌抗体阳性兔血清。该蛋白为布鲁氏菌病诊断试剂盒研制及疫苗研发奠定了基础。
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关 键 词: | 布鲁氏菌 BP26重组蛋白 蛋白免疫印迹 胶体金试纸条 |
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