T细胞表位对新型冠状病毒疫苗诱导抗体反应的影响

目的 通过构建严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2, SARS-CoV-2)S1蛋白与通用型辅助性T淋巴细胞表位(pan HLA DR-binding epitope, PADRE)融合的DNA疫苗，探讨PADRE对S1蛋白DNA疫苗诱导抗体水平的影响。方法 以pJW4303质粒为载体分别构建表达S1蛋白的重组质粒(pJW4303-S1)、表达S1和PADRE融合蛋白的重组质粒(pJW4303-S1-PADRE)。以人源密码子优化的SARS-CoV-2刺突蛋白基因为模板设计引物，PCR扩增获得基因片段，并将其克隆入真核表达载体pJW4303。对pJW4303-S1、pJW4303-S1-PADRE进行PCR扩增和酶切，产物通过琼脂糖凝胶电泳验证，并将重组质粒进行测序。构建正确的质粒转染293T细胞，Western blot验证蛋白体外表达情况。以C57BL/6小鼠为实验动物并分组，采用不同的免疫接种策略进行动物免疫，每次免疫间隔2周，免疫前采血，第6次免疫2周后处死小鼠并采血。通过ELISA检测...