紫外分光光度法测定白喉毒素无毒突变体CRM197的蛋白含量

目的 基于紫外分光光度法，建立一种测定白喉毒素无毒突变体CRM197蛋白含量的方法。方法 在天然折叠状态和非折叠状态(CRM197蛋白经盐酸胍变性)下，分别测定相同含量的CRM197蛋白A_{280 nm}值，再根据朗伯-比尔定律c=A/εL计算其折叠状态消光系数。同时，使用当前建立的方法与BCA法分别测定CRM197蛋白的含量，并对2种方法的差异和检测特点进行比较分析。结果 根据CRM197蛋白的氨基酸一级序列与相对分子质量计算出其理论消光系数为0.934 mL/(mg·cm),在280 nm处的实验消光系数为(0.959±0.006)mL/(mg·cm)。2种方法测定同一蛋白样本的结果一致，分别为(2.17±0.02) mg/mL和(2.14±0.09)mg/mL;本方法检测值的CV为0.70%,BCA法检测值的CV为4.15%。结论 本研究建立的CRM197蛋白含量测定方法准确性高、线性范围宽、获取数据快，可用于CRM197蛋白含量的测定，同时为其他载体蛋白的含量测定提供了参考。