慢病毒介导SRB-1 受体基因沉默对人脑小胶质细胞吞噬Aβ蛋白能力的影响 |
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引用本文: | 张郃,张阳鑫,刘文娜,郑翰轩,王威.慢病毒介导SRB-1 受体基因沉默对人脑小胶质细胞吞噬Aβ蛋白能力的影响[J].现代生物医学进展,2016,16(32):6201-6205. |
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作者姓名: | 张郃 张阳鑫 刘文娜 郑翰轩 王威 |
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作者单位: | 首都医科大学宣武医院药剂科 |
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基金项目: | 国家自然科学基金青年科学基金项目(81503158) |
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摘 要: | 目的:利用慢病毒载体筛选人脑小胶质细胞(HM1900)清道夫受体SRB1基因敲减稳定细胞系,检测该细胞系对AD致病蛋白Aβ的吞噬水平变化。方法:采用反转录PCR确认人脑小胶质细胞(HM1900)SRB1(Gene ID:949)基因表达情况,利用软件设计三组不同序列的针对人SRB1基因的慢病毒sh RNA干扰载体,包装为慢病毒感染HM1900细胞,实时荧光定量PCR检测各慢病毒干扰载体的靶基因干扰效率。选用干扰效果最佳的RNA干扰慢病毒筛选并获得SRB1基因敲减细胞系,稳定传代后用realtime-PCR检测SRB1受体表达下调情况。通过蛋白内吞实验测定基因敲减后该细胞系对病理蛋白Aβ的吞噬能力,与正常小胶质细胞进行比较。结果:利用筛选出的干扰载体完成对HM1900细胞系的SRB1基因敲减,荧光定量PCR检测显示SRB1基因在靶细胞HM1900中表达抑制率达83.7%。蛋白内吞实验显示该基因敲减细胞系对病理蛋白Aβ的吞噬能力下降到对照组的57%(P0.05)。结论:通过慢病毒载体成功建立SRB1基因稳定敲减的人脑小胶质细胞系,SRB1受体参与了小胶质细胞对病理蛋白Aβ的吞噬及清除过程。
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关 键 词: | 人脑小胶质细胞 SRB1 受体 基因敲减 慢病毒 吞噬 |
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