两拷贝β-甘露聚糖酶基因在毕赤酵母中的表达

目的:旨在获得高效分泌表达的两拷贝β-甘露聚糖酶(β-mannase)毕赤酵母工程菌株。方法:以作者研究室保藏的黑曲霉β-mannase X33菌株(X33-β-mannase)为出发菌株,体外构建两拷贝重组质粒pPIC-mannase,用电击法转化至X33感受态细胞,用抗生素Zeocin筛选阳性转化子,用BMGY培养基培养,BMMY诱导其表达,利用DNS法测定酶活。结果:实验已成功构建了两拷贝β-mannase毕赤酵母工程菌株,50 L发酵罐培养7 d后,β-mannase产酶水平达到21 300 U/ml。