血满草RAPD-PCR反应体系的建立与DNA指纹图谱研究

目的:获得稳定性、重复性好的RAPD-PCR反应体系,并构建血满草DNA指纹图谱和进行遗传多样性分析。方法:以血满草3个居群11个个体的幼叶为材料,CTAB法提取基因组DNA,从模板浓度、引物浓度、d NTPs浓度和Taq DNA聚合酶的用量,构建最佳的RAPD-PCR反应体系,通过扩增带型的差异构建其DNA指纹图谱,利用Popgen32、NTSYS2进行遗传多样性分析。结果:3个RAPD引物扩增血满草3个居群11个样品共获得27条可靠、清晰和重复性高的条带,其中17条是多态条带。引物SBSA5和SBSA11扩增条带组合可以构建11个样品的个体特异DNA指纹图谱。供试血满草居群间遗传距离在0.1493~0.2312之间;居群内的遗传多样性分别为0.1102、0.0153、0.2294。遗传距离和相似性聚类分析表明,样品间的遗传距离与居群的地理分布关系不明显。结论:RAPD分子标记在构建血满草DNA指纹图谱是可行的,由其构建的指纹图谱可以将供试个体相互区分鉴别出来。无论是居群间还是居群内,供试血满草的遗传多样性均较低,居群间的遗传分化较小,可能还在属于同一个大的居群。