浙贝母鲨烯合酶核心功能区基因克隆与序列分析

目的:克隆浙贝母次级代谢途径的关键酶——鲨烯合酶(SQS)的基因,有助于对次生代谢产物的合成进行调控。方法:根据NCBI上公布的8种植物SQS蛋白序列,分析高度保守区并设计简并引物。从浙贝母幼根中提取总RNA,利用RT-PCR技术成功扩增出高度保守区基因片段。再利用GSP引物和RACE技术中克隆出3’末端片段。结果:获得浙贝母SQS 1 122bp核苷酸序列,编码374个氨基酸。Protein-Blast比对发现与印度甘松、柴胡、马铃薯、拟南芥、紫杉五种植物的同源性分别达到76%、74%、75%、74%、73%,包含了底物结合位点、Mg2+结合位点、催化活性位点等。该序列在Genbank中的登录号为:KF551097。结论:通过蛋白质特征区、保守区以及进化树分析,初步确定该基因为SQS基因。这是首次从药用植物浙贝母中克隆得到甲羟戊酸途径关键酶SQS的基因核心功能片段,为浙贝母次生代谢工程研究打下良好的基础。