| PCR-寻靶体系构建棒状链霉菌励基因插入突变的重组质粒pELA |
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| 引用本文： | 左志晗,王艳萍.PCR-寻靶体系构建棒状链霉菌励基因插入突变的重组质粒pELA[J].生物技术通报,2007(6):141-145,149. |
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| 作者姓名： | 左志晗 王艳萍 |
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| 作者单位： | 天津食品营养与安全重点实验室天津科技大学食品工程与生物技术学院,天津300457 |
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| 基金项目： | 天津市2004年自然科学重点基金项目（043802711）资助 |
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| 摘 要： | 本实验将PCR所得的1．8kb的地基因片段插入到pUCm-T载体的多克隆位点，得到重组质粒pUCm-T-lat．经EcoRI—HindⅢ双酶切后得到妇基因片段，与经同样双酶切的穿梭质粒pGH112进行连接，得到重组质粒pGH112-lat。将其电转至大肠杆菌E．coli BW25113／pIJ790中得到E．coli BW25113／pIJ790／pGH112-lat。同时，根据棒状链霉菌纽基因的序列及质粒pIJ773（pIJ773为可提供阿泊拉抗性的模板质粒）中阿泊拉抗性基因（aac（3）iv）的序列设计一对长59nt及58nt的引物，两引物分别含有20nt及19nt的阿泊拉抗性基因的互补序列和39nt的纽基因两端的互补序列，以质粒pip73为模板，PCR扩增得到的产物为两端带有纽基因上下游同源序列的阿泊拉抗性基因，将此PCR产物称为阿泊拉抗性框，将此阿泊拉抗性框电转至E-coli BW25113／pIJ790／pGH112-lat转化子中。在质粒pIJ790的作用下，阿泊拉抗性框中两端的纽基因同源序列与pGH112-lat中的野生型勉基因发生同源双交换，使得阿泊拉抗性框插入地基因中，得到纽基因中插入阿泊拉抗性基因（lat：：apr）的重组质粒pELA。该质粒的构建为进一步构建棒状链霉菌地基因插入阻断的突变株，从而实现克拉维酸产量的提高奠定了初步基础。
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| 关 键 词： | 棒状链霉菌 克拉维酸 PCR-寻靶 lat 重组质粒 |
| 收稿时间： | 2007-07-19 |
Construction of S.clavuligerus Recombinant Plasmid pELA lat Gene Inserted Mutant by PCR-targeting System |
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| Zuo Zhihan Wang Yanping.Construction of S.clavuligerus Recombinant Plasmid pELA lat Gene Inserted Mutant by PCR-targeting System[J].Biotechnology Bulletin,2007(6):141-145,149. |
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| Authors: | Zuo Zhihan Wang Yanping |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Sclavuligerus Clavulanic acid PCR-targeting Lat Recombinant plasmid |
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