| 结核分枝杆菌CFP10、ESAT6、Ag85A和Ag85B抗原真核共表达载体的构建与表达 |
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| 引用本文： | 李武,邓光存,刘晓明,王玉炯.结核分枝杆菌CFP10、ESAT6、Ag85A和Ag85B抗原真核共表达载体的构建与表达[J].生物工程学报,2014,30(2):265-273. |
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| 作者姓名： | 李武 邓光存 刘晓明 王玉炯 |
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| 作者单位： | 宁夏大学 西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室，宁夏 银川 750021;宁夏大学 西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室，宁夏 银川 750021;宁夏大学 西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室，宁夏 银川 750021;宁夏大学 西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室，宁夏 银川 750021 |
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| 基金项目： | 国家重点基础研究发展计划 (973计划) (Nos. 2012CB126301，2012CB518801)，国家自然科学基金 (No. 31160515)，高等学校博士学科点专项科研基金 (No. 20126401110001)，国家科技支撑计划项目 (No. 2012BAD12B07-4) 资助。 |
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| 摘 要： | CFP10、ESAT6、Ag85A和Ag85B是结核分枝杆菌的主要免疫优势抗原。为了构建一种可同时表达这4种抗原的真核多基因共表达载体pcDNA-CFP10-ESAT6-Ag85A-Ag85B(pcDNA-CEAB),并利用HEK 293T细胞对其体外表达进行检测。采用酶切、连接的方法,将CFP10和ESAT6编码基因以(Gly4Ser)3蛋白Linker连接,插入至质粒pcDNA3.1(+)多克隆位点CMV启动子与加尾信号BGH pA之间,使两者融合表达,将Ag85A和Ag85B编码基因以内部核糖体进入位点(Internal ribosome entry site,IRES)序列连接,并赋予RSV启动子和加尾信号BGH pA,使两者在RSV启动子作用下独立表达。重组质粒经酶切及测序验证后转染至HEK 293T细胞中进行体外表达实验,48 h后提取总蛋白,利用CFP10、ESAT6、Ag85A和Ag85B特异性抗体进行Western blotting检测。结果显示多基因共表达载体pcDNA-CEAB在真核细胞HEK 293T中得到表达,且CFP10、ESAT6、Ag85A和Ag85B抗原能被相应的特异性抗体所识别,表明质粒pcDNA-CEAB构建正确,这为进一步研究其免疫原性和免疫保护效果奠定了基础。
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| 关 键 词： | 结核分枝杆菌 优势抗原 共表达 蛋白免疫印迹 |
| 收稿时间： | 2013/4/24 0:00:00 |
Construction and expression of a eukaryotic vector co-expressing immunodominant antigens of CFP10, ESAT6, Ag85A and Ag85B of Mycobacterium tuberculosis |
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| Wu Li,Guangcun Deng,Xiaoming Liu and Yujiong Wang.Construction and expression of a eukaryotic vector co-expressing immunodominant antigens of CFP10, ESAT6, Ag85A and Ag85B of Mycobacterium tuberculosis[J].Chinese Journal of Biotechnology,2014,30(2):265-273. |
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| Authors: | Wu Li Guangcun Deng Xiaoming Liu and Yujiong Wang |
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| Institution: | Key Laboratory of Ministry of Education for Conservation and Utilization of Special Biological Resources in the Western, Ningxia University, Yinchuan 750021, Ningxia, China;Key Laboratory of Ministry of Education for Conservation and Utilization of Special Biological Resources in the Western, Ningxia University, Yinchuan 750021, Ningxia, China;Key Laboratory of Ministry of Education for Conservation and Utilization of Special Biological Resources in the Western, Ningxia University, Yinchuan 750021, Ningxia, China;Key Laboratory of Ministry of Education for Conservation and Utilization of Special Biological Resources in the Western, Ningxia University, Yinchuan 750021, Ningxia, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Mycobacterium tuberculosis immunodominant antigen co-expression Western blotting |
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