十字花科黑腐病菌III型效应物基因avrACXcc8004推测的启动子区

摘要:【目的】十字花科黑腐病菌(Xanthomonas campestris pv．campestris，Xcc)，能侵染所有十字花科植物，引起黑腐病。Xcc通过III型分泌系统(Type III Secretion System，T3SS)将III型效应物(T3SS effector，T3SE)蛋白直接转运到植物细胞内，T3SEs对于病原菌致病性至关重要。许多已鉴定的T3SEs基因的启动子区都 存在植物诱导启动子盒(Plant-inducible promoter，PIP-box)和－10box，但PIP-box及－10 box与经典的启动子－10区及－35区之间的关系如何未见报道，－10 box的序列保守性如何也未见报道。本研究旨在对T3SE基因avrACXcc8004推测的启动子区进行研究。【方法】首先，通过5'RACE 确定其转录起始位点，接着用Fusion PCR对－10 box TACGTT序列中倒数第二个碱基T进行点突变为A/C/G，即:TACGAT、TACGCT和TACGGT，构建GUS融合报告菌株，定量测定GUS酶活。【结果】5'RACE结果显示avrACXcc8004的转录起始位点为A，对比分析得到启动子的－35区位于PIP-box之后8bp处，而－10区与－10 box重叠;avrACXcc8004启动子区的PIP-box和－35区、－ 10 box的整个模体为:TTCAC-N15 -TTCGC-N8 -TTGATG-N18 -TACGTT。最后，GUS定量测定结果表明，突变为C 时( TACGCT)的菌株的GUS 酶活最高，突变为G 时(TACGGT)的酶活增高最 少。在ΔhrpX 和ΔhrpG 中的GUS 酶活均比在Xcc 8004 中有显著的降低。【结论】Xcc 的T3SE 基因PIP-box与－35区前后相衔，－10 box即－10区，－10 box对于avrACXcc8004的转录活性有较大的影响，－ 10 box突变前后avrACXcc8004均受HrpG 和HrpX 正向调控。

Putative promoter region of type III effector gene avrACXcc8004 in Xanthomonas campestris pv. campestris