| 日本脑炎病毒NS3蛋白酶活性检测及抑制剂高通量筛选方法的建立 |
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| 引用本文： | 周景云,汪雪,裴超,宋云峰,陈焕春. 日本脑炎病毒NS3蛋白酶活性检测及抑制剂高通量筛选方法的建立[J]. 生物工程学报, 2014, 30(2): 194-202 |
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| 作者姓名： | 周景云 汪雪 裴超 宋云峰 陈焕春 |
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| 作者单位： | 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室，湖北 武汉 430070；华中农业大学动物医学院，湖北 武汉 430070;华中农业大学动物医学院，湖北 武汉 430070;华中农业大学动物医学院，湖北 武汉 430070;华中农业大学农业微生物学国家重点实验室，湖北 武汉 430070；华中农业大学动物医学院，湖北 武汉 430070;华中农业大学农业微生物学国家重点实验室，湖北 武汉 430070；华中农业大学动物医学院，湖北 武汉 430070 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金 (No. 30800831)，国家高技术研究发展计划 (863计划) (No. 2011AA10A212) 资助。 |
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| 摘 要： | 日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)是单股正链RNA病毒,全基因组仅含有一个开放阅读框,编码一条多聚蛋白前体,病毒编码的NS3蛋白酶在JEV多聚蛋白加工过程中起着重要作用,是重要的药物靶标。通过PCR扩增了NS2BH-NS3蛋白酶的编码区,构建了原核表达质粒并转化到大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导得到可溶性的NS3蛋白酶,用镍亲和层析方法进行了纯化。建立了基于荧光共振能量转移的NS3蛋白酶活性检测方法,并确定了最佳的反应条件,对113个化合物进行了筛选,发现其中两个化合物对JEV NS3蛋白酶具有一定的抑制活性。本研究为JEV NS3蛋白酶的活性研究及抑制剂筛选提供了一种操作方便、成本低廉的方法。
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| 关 键 词： | 日本脑炎病毒 NS蛋白酶 可溶性表达 酶活性 抑制剂高通量筛选 |
| 收稿时间： | 2013-05-06 |
Method for Japanese encephalitis virus NS3 protease activity analysis and high-throughput screening assay for inhibitors |
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| Jingyun Zhou,Xue Wang,Chao Pei,Yunfeng Song and Huanchun Chen. Method for Japanese encephalitis virus NS3 protease activity analysis and high-throughput screening assay for inhibitors[J]. Chinese journal of biotechnology, 2014, 30(2): 194-202 |
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| Authors: | Jingyun Zhou Xue Wang Chao Pei Yunfeng Song Huanchun Chen |
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| Affiliation: | State Key Laboratory of Agricultural Microbiology, Huazhong Agricultural University, Wuhan 430070, Hubei, China; College of Veterinary Medicine, Huazhong Agricultural University, Wuhan 430070, Hubei, China;College of Veterinary Medicine, Huazhong Agricultural University, Wuhan 430070, Hubei, China;College of Veterinary Medicine, Huazhong Agricultural University, Wuhan 430070, Hubei, China;State Key Laboratory of Agricultural Microbiology, Huazhong Agricultural University, Wuhan 430070, Hubei, China; College of Veterinary Medicine, Huazhong Agricultural University, Wuhan 430070, Hubei, China;State Key Laboratory of Agricultural Microbiology, Huazhong Agricultural University, Wuhan 430070, Hubei, China; College of Veterinary Medicine, Huazhong Agricultural University, Wuhan 430070, Hubei, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Japanese encephalitis virus NS3 protease solubility expression activity analysis high throughput screening for inhibitors |
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